酒醅發(fā)酵液降解河豚毒素的初步研究.pdf

1、河豚毒素(TTX)是一種神經(jīng)性毒素，劇毒，它是一種阻斷劑，妨礙Na+的傳導(dǎo)，一般情況下是“兩性離子”的存在形式。其毒性比氰化鉀還要強(qiáng)1000多倍。由于河豚肉新鮮美味，食用它的人很多，沿海地區(qū)和日本需求量較大。因此每年因食用河豚魚而導(dǎo)致中毒乃至死亡的事件特別多。但是隨著對其研究的逐漸深入以及海洋藥物不斷被開發(fā)和利用，TTX在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的作用漸漸變廣泛，而且在神經(jīng)學(xué)領(lǐng)域以及生物學(xué)研究等方面也有應(yīng)用。TTX不僅存在于河豚魚魚體中，還存在于許多其

2、他動物體中（脊椎或是無脊椎動物）。至于TTX的起源問題長時間以來存在著爭議，現(xiàn)在微生物起源假說更為人們所接受。依據(jù)微生物在毒素降解方面的作用，特別是對和TTX具有相似結(jié)構(gòu)的物質(zhì)如石房蛤毒素的降解作用，本實(shí)驗(yàn)主要為了研究酒醅中所含微生物對TTX降解的可能性，并探討酒醅降解TTX的原因。
　　以山西杏花春汾酒有限公司提供的酒醅為降解材料，利用免疫層析檢測法對酒醅降解后的河豚毒素進(jìn)行檢測。
　　為優(yōu)化酒醅對河豚毒素的降解條件，本實(shí)

3、驗(yàn)以酒廠釀酒發(fā)酵了24天的酒醅為降解材料，用免疫層析檢測法來考察酒醅添加量、降解溫度、降解時間、搖床轉(zhuǎn)速等因素對TTX降解效果的影響，最后在最優(yōu)因素條件下，用小鼠生物法評價酒醅對TTX的降解效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：當(dāng)酒醅添加量為16g，溫度為30℃，搖床轉(zhuǎn)速為50r/min的條件下，酒醅降解TTX的能力最強(qiáng)；在上述最優(yōu)條件下，隨著TTX降解時間的增加，昆明鼠的死亡時間被不斷地延長，在第五天之后便保持不變。
　　實(shí)驗(yàn)中用酒醅降解河豚卵巢

4、，結(jié)果卵巢的毒性有下降。進(jìn)一步證實(shí)了在現(xiàn)實(shí)生活中用酒醅來降解河豚魚廢棄器官防止環(huán)境二次污染的可能性。對酒醅微生物進(jìn)行分離培養(yǎng)之后到了革蘭氏陽性芽孢菌（細(xì)菌類），兩種主要霉菌和酵母菌。同時對酒醅發(fā)酵過程中的含水量和酸度進(jìn)行了測試，發(fā)現(xiàn)含水量不斷在增加，最后才下降，而酸度則剛開始稍微下降后又不斷上升。由于含水量和酸度的變化與酒醅中微生物數(shù)量的變化有很大的關(guān)系，酒醅中含水量的增加和酸度的先下降后上升，都是酒醅中微生物數(shù)量增多的緣故。用酒醅中分

5、離培養(yǎng)得到的四種微生物來降解河豚毒素，沒有看到毒性的變化，用四種微生物（根霉，曲霉，青霉，乳酸菌）來降解河豚毒素也沒有看到效果。一個原因可解釋為單株菌對河豚毒素沒降解能力，第二個原因可能是是這些菌都不是降解河豚毒素的優(yōu)勢菌株。第三個原因可能是微生物不是降解河豚毒素的原因，真正有降解作用的是酒醅發(fā)酵過程中產(chǎn)生的活性酶等物質(zhì)。
　　為了區(qū)別生物轉(zhuǎn)化作用和物理吸附作用。以PBS溶液為陰性對照，對重復(fù)洗了三次的酒醅離心后的剩余固體中所含河

6、豚毒素進(jìn)行試紙條檢測，測磁信號值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者的T線和C線的磁信號值相差不大，也就是說在酒醅降解離心后的固體中幾乎檢測不到河豚毒素的存在。因?yàn)槲⑸镂阶饔檬莻€可逆的過程，用溶液洗滌后，被吸附的毒素可重新溶解到溶液中。本實(shí)驗(yàn)在離心固體的洗滌液中檢測不到河豚毒素，這就可以排除是微生物吸附結(jié)合河豚毒素的原因，所以酒醅降解河豚毒素是一個生物轉(zhuǎn)化的作用，可能是微生物轉(zhuǎn)化的作用，也有可能是酒醅發(fā)酵過程中產(chǎn)生的活性物質(zhì)的降解作用。
　　從酒醅

7、，酒醅上清液，破碎酒醅上清液對河豚毒素的降解結(jié)果來看。他們的降解能力沒有很大區(qū)別。酒醅與酒醅上清液的降解結(jié)果一樣表示酒醅能夠降解河豚毒素不是細(xì)菌的作用，可能是酒醅發(fā)酵過程中產(chǎn)生的一種活性物質(zhì)具有降解作用，酒醅上清液與破碎酒醅上清液的降解結(jié)果一樣則說明能夠降解河豚毒素的物質(zhì)是產(chǎn)生于胞外，而非胞內(nèi)。用競爭性ELISA方法比較酒醅上清和破碎酒醅上清的降解作用，結(jié)果顯示兩者的降解效果之間沒顯著差異性，這進(jìn)一步說明了降解河豚毒素的物質(zhì)產(chǎn)生于胞外，