伏馬菌素B1對Sf9細胞毒性及作用機理研究.pdf

1、伏馬菌素（FBs）是由串珠鐮刀菌（Fusariumvertieilliodes）和再育鐮刀菌（Fusarium proliferatum）產(chǎn)生的一類水溶性代謝物，是污染糧食作物及其制品的一種主要真菌毒素，也是2B類致癌物（可能致癌物），對動物和人類的健康有很大的潛在危害。目前為止，有關伏馬菌素毒性作用機理尚不是很清楚；同時，伏馬菌素對昆蟲細胞的毒性及作用機制也不明確。Sf9細胞系是草地貪夜蛾（Spodoptera frugperda）的

2、卵巢細胞，易培養(yǎng)，不需要使細胞孵育在 CO2中，且可在細胞水平提供相應的信息，是藥物毒性研究有力可靠的工具。本研究以Sf9細胞為供試細胞，開展伏馬菌素對Sf9細胞的毒性及作用機理研究，研究結果如下：
　　1、采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法測定了不同濃度(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的伏馬菌素B1對Sf9細胞的毒性。處理48 h后，Sf9細胞增殖的

3、抑制率分別為10.5％，20.3%，30.9%，49.9%和65.4%。
　　2、選取增殖抑制率為10%、30%、50%對應濃度（25 mg/L、50 mg/L、200 mg/L）的伏馬菌素B1處理Sf9細胞，48 h后，采用倒置顯微鏡觀察Sf9細胞形態(tài)的變化。結果發(fā)現(xiàn)，對照組細胞外部形態(tài)飽滿，生長狀態(tài)良好，25 mg/L的伏馬菌素B1處理Sf9細胞后，部分細胞膨大，多數(shù)細胞仍可增殖；50 mg/L的伏馬菌素B1處理Sf9細胞后，

4、膨大狀態(tài)細胞比例增加，部分細胞出現(xiàn)空泡；200 mg/L的伏馬菌素B1處理Sf9細胞后，細胞增殖受到明顯抑制，空泡化細胞比例增加，且部分細胞出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象。
　　3、以抑制率為10%、30%、50%濃度（25 mg/L、50 mg/L、200 mg/L）的伏馬菌素B1處理Sf9細胞，48 h后觀察，發(fā)現(xiàn)伏馬菌素B1引起Sf9細胞G2/M期的阻滯；引起Sf9細胞膜電位去極化；引起Sf9細胞發(fā)生凋亡，凋亡率分別為16.65%、16.89

5、%和21.90%；還可引起Sf9細胞線粒體膜電位超極化。
　　4、以抑制率為50%濃度的伏馬菌素B1處理Sf9細胞，進行轉錄組分析，篩選差異表達基因。差異明顯的基因主要有：
　?。?）解毒藥物代謝相關基因及代謝通路：Sf9細胞主要通過啟動細胞色素P450（Cytochrome P450）、谷胱甘膚-S-轉移酶（GSTs）、尿苷二磷酸-糖基轉移酶(UGTs)基因的過量表達來應對伏馬菌素B1的毒性作用。
　　（2）生長發(fā)育

6、相關基因及代謝通路：伏馬菌素B1通過影響細胞的微管結合蛋白1、細胞粘附分子蛋白、生長因子蛋白及打破昆蟲體內蛻皮激素和保幼激素的平衡等來影響細胞的增殖。
　?。?）免疫相關基因及代謝通路：Sf9細胞啟動Toll樣受體信號通路和吞噬體信號通路產(chǎn)生免疫反應來應對伏馬菌素B1對機體的傷害。
　?。?）凋亡相關基因及代謝通路：伏馬菌素B1誘導Sf9細胞啟動JNK和p38 MAPK信號轉導通路，加快細胞凋亡的進程，進而引起細胞凋亡。