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1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文抗伏馬菌素B單鏈抗體的制備姓名:劉曉雷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):微生物學(xué)指導(dǎo)教師:汪世華20100401福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文PreparationofSingleChainAntibodyvariableFragmentagainstFumonisinBIAbstractFumonisin,akindofmycotoxinderivedfromFusariummoniliforme,canpollutecrop
2、sandtheirproductswidelyIthasdiversetoxicitythatthreatensthehealthofhumanbeingsandanimalsThisstudyintendedtoestablishamethod,whichWasbasedonrecombinantsinglechainantibodyagainstfumonisinBI,todetectthecontentsoffumonisinBl
3、infoodandfeedquicklyandefficientlyFBlisamicromoleculeandhapten,SOitneedstocouplewithamacromoleculeproteinandtheconjugatewillbecomeacompleteantigen’Inthisresearch,fumonisinBl(FB1)Waspurchased,andglutaraldehyde(GA)one—step
4、methodwasusedtoprepareFBIBSAconjugateandGAtwo—stepmethodtoprepareFBI’KLHconjugateFBlBSAwasusedasimmunizingantigenandFB1KLHWasusedfordetection,andthebothconjugateswereprovedbythefollowingtiterassayresultsofantiserumBalb/c
5、micewereimmunized晰tllFBI—BSAconjugate,andthetiterofmiceantiserumwasassayedbyELISAafterboosterwhichachievedtheexpectationThen,theimmunizedmousewaskilledanditsspleenwasseparatedTotalRNAWasextractedfromthespleenandthefirsts
6、trandofcDNAWasobtainedbyreversetranscriptionAndthegenes%and圪,fromcDNAtemplatewereusedtoconstructgenescFvSubsequently,phageantibodylibrarywasestablishedafterthegenescFvWasclonedintophageplasmidpCANTAB5EScFvpanningfromthel
7、ibrarybyphagedisplaytechniqueswascarriedoutThesolubleexpressionandidentificationofscFvwereperformedFinally,weobtainedonestrainofphageantibodybeingabletoproducescFvwithhighaffinityKeyWords:fumonisin;singlechainantibody;ph
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