伏馬毒素B-,1-和葡萄球菌腸毒素A、B的免疫芯片檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、免疫芯片是蛋白質(zhì)芯片的一種，是指固定于支持介質(zhì)上的蛋白質(zhì)構(gòu)成的微陣列。該技術(shù)與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，有著一定的優(yōu)越性，因此，日益受到人們的青睞。該研究是以伏馬毒素B<,1>、葡萄球菌腸毒素A、B為檢測(cè)對(duì)象，建立了用于伏馬毒素B<,1>、葡萄球菌腸毒素A、B檢測(cè)的免疫芯片的技術(shù)方法。 本研究先將抗原或抗體固定在醛基化玻片表面，利用經(jīng)戊二醛等試劑處理過的表面帶有醛基的玻璃片作為載體，通過載體表面的醛基與抗原或抗體的游離氨基的結(jié)合實(shí)現(xiàn)抗

2、原或抗體的固定。 在檢測(cè)伏馬毒素B<,1>時(shí)采用抗體競(jìng)爭(zhēng)法。檢測(cè)時(shí)將待測(cè)物伏馬毒素B<,1>與一定量的Cv3標(biāo)記的伏馬毒素B<,1>-牛血清白蛋白同時(shí)加到玻片上。待測(cè)物伏馬毒素B<,1>與標(biāo)記的伏馬毒素B<,1>-牛血清白蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合玻璃片上固定的抗體。由于標(biāo)記物是定量的，當(dāng)待測(cè)物濃度越高則結(jié)合上的伏馬毒素B<,1>越多，而結(jié)合上的標(biāo)記物就越少，從而熒光信號(hào)強(qiáng)度就越弱。反之，熒光信號(hào)就越強(qiáng)，從而實(shí)現(xiàn)了待測(cè)物的測(cè)定。最低檢測(cè)濃度為

3、1 ug/ml的伏馬毒素B<,1>。 在檢測(cè)葡萄球菌腸毒素A、B時(shí)采用雙抗體夾心法。對(duì)影響免疫芯片檢測(cè)結(jié)果的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化，檢測(cè)時(shí)將SEA、SEB加入反應(yīng)池中，反應(yīng)后清洗掉未結(jié)合的SE，再加入相應(yīng)的標(biāo)記抗體，形成固定抗體-待測(cè)物-標(biāo)記抗體的央心式結(jié)構(gòu)。當(dāng)待測(cè)物越多時(shí)，結(jié)合上的抗原就多，相應(yīng)結(jié)合上的標(biāo)記抗體也越多，產(chǎn)生的熒光信號(hào)也越強(qiáng)，熒光信號(hào)強(qiáng)度隨待測(cè)物濃度的增加而增加，當(dāng)濃度高于一定值時(shí)，熒光信號(hào)強(qiáng)度趨于一定值。按優(yōu)化后的