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文檔簡介
1、目的:構(gòu)建金黃色葡萄球菌腸毒素B(Staphylococcal Enterotoxin B，SEB)編碼基因的原核表達(dá)克隆，并在大腸桿菌中表達(dá)，同時(shí)對(duì)表達(dá)蛋白的生物學(xué)活性進(jìn)行研究。 方法:提取產(chǎn)腸毒素B的金黃色葡萄球菌臨床分離菌株的DNA，DNAstar軟件輔助設(shè)計(jì)引物，PER擴(kuò)增出腸毒素B(SEB)成熟肽前體蛋白基因，將其插入到質(zhì)粒pGEX-4T-2編碼谷胱肽轉(zhuǎn)移酶(GST)讀碼框架下游的多克隆位點(diǎn)(MCS)，構(gòu)建原核表達(dá)克隆
2、PGEX-4T-2/SEB。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切、測序鑒定后，以和TSS法轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5 α，用終濃度為1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá)，SDS-PAGE電泳分析表達(dá)蛋白圖譜，Western blot鑒定表達(dá)蛋白。 結(jié)果:經(jīng)酶切和測序分析表明，克隆獲得了金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)的編碼基因，且插入片段讀碼框架正確，無堿基錯(cuò)配，pGEX-4T-2/SEB原核表達(dá)克隆構(gòu)建成功。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌表達(dá)
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