黃曲霉毒素B-,1-免疫檢測標準品替代研究.pdf

1、黃曲霉毒素(Aflatoxin)主要是由寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)和產(chǎn)毒的黃曲霉(A.flavus)污染糧油及其制品、飼料所產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素中比例最大、毒性最強的是黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1，AFB1)，具有較強的急慢性毒性，國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)將AFB1列為Ⅰ級致癌物。由于AFB1污染食品的途徑很多，因此要完全杜絕AFB1的污染是不可能的，控制黃曲霉毒素對人類健康危害

2、的最好方法是加強檢測和監(jiān)督控制。應(yīng)用抗AFB1單克隆抗體的免疫分析檢測方法測定食品中的AFB1得到推廣應(yīng)用。但在進行AFB1檢測過程中有一個共同的不足之處是必須接觸較高濃度的AFB1標準品，很多檢測人員對頻繁接觸AFB1這種具有強致癌作用的物質(zhì)具有很強的心理戒備。另外，由于生物恐怖事件屢屢發(fā)生，世界各國對于強毒物質(zhì)的進出口均嚴格限制，毒素標準品已經(jīng)成為嚴重制約食品安全檢測的瓶頸。 根據(jù)Jerne提出的免疫網(wǎng)絡(luò)學說，機體對外來抗原

3、的免疫應(yīng)答將觸發(fā)一個復(fù)雜的連鎖反應(yīng)。在抗原的刺激下，機體產(chǎn)生Ab1，Ab1又刺激Ab2的產(chǎn)生，Ab2再刺激Ab3的產(chǎn)生……，如此等等，在體內(nèi)構(gòu)成了復(fù)雜的獨特型與抗獨特型的網(wǎng)絡(luò)。抗獨特型抗體(Ab2)是指針對獨特型抗體(Ab1)的獨特型抗原決定基產(chǎn)生的抗體。Ab1上不同的獨特型決定位可以刺激產(chǎn)生不同類型的Ab2，主要分為4種類型包括Ab2a、Ab2β、Ab2γ和Ab2e，其中Ab2β具有抗原“內(nèi)影像”(internalimage)的作用，

4、可模擬抗原誘導(dǎo)機體產(chǎn)生針對始動抗原的特異性抗體，在體外可與Ab1上獨特型表位(IdX)相結(jié)合。Ab2β能模擬抗原的原理提供了一種新的免疫試劑，由于其和相對應(yīng)的生物毒素在空間構(gòu)象上存在著所謂的內(nèi)影像關(guān)系，利用Ab2β作為AFB1的替代品用于食品中AFB1的免疫檢測，從而實現(xiàn)無毒檢測，并打破國際禁運的約束，降低檢測成本。選用日本大耳白兔進行抗抗總黃曲霉毒素單抗獨特型多克隆抗體的制備和鑒定，從靈敏度、特異性、在試劑盒中的替代效果等方面與AFB

5、1標準品進行對比和替代研究，并建立了玉米中AFB1的無毒ELISA檢測方法，研制出AFB1無毒ELISA檢測試劑盒，為黃曲霉毒素B1的無毒檢測提供物質(zhì)和理論依據(jù)。 結(jié)論:1.抗抗總黃曲霉毒素單克隆抗體獨特型抗體的亞類為Ab2β。 2.抗抗總黃曲霉毒素單克隆抗體獨特型抗體特異性強，完全可以在免疫檢測中替代黃曲霉毒素B1標準品。 3.抗抗總黃曲霉毒素單克隆抗體獨特型抗體作為標準品的替代品與黃曲霉毒素B1毒素標準品之間