黃曲霉毒素的時(shí)間分辨熒光高靈敏免疫檢測(cè)技術(shù).pdf

1、分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)碩士學(xué)位論文黃曲霉毒素的時(shí)間分辨熒光高靈敏免疫檢測(cè)技術(shù)學(xué)位申請(qǐng)人：人：王坤指導(dǎo)教師：師：侯玉澤教授學(xué)科專業(yè)：業(yè)：食品科學(xué)學(xué)位類別：別：農(nóng)學(xué)2013年6月摘要論文題目：論文題目：黃曲霉毒素的時(shí)間分辨熒光高靈敏免疫檢測(cè)技術(shù)黃曲霉毒素的時(shí)間分辨熒光高靈敏免疫檢測(cè)技術(shù)專業(yè)：業(yè)：食品科學(xué)食品科學(xué)研究生：生：王坤指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師：侯玉澤教授侯玉澤教授摘要黃曲霉毒素B1（AFB1）是由真菌的部分產(chǎn)毒菌株產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，廣泛存

2、在于各類食品中，在自然界分布也很廣泛，它的毒性是最強(qiáng)的。黃曲霉毒素B1是主要對(duì)人類和動(dòng)物的肝臟、腎臟的能夠產(chǎn)生強(qiáng)毒和強(qiáng)致癌，AFB1主要污染玉米、大豆、飼料等，進(jìn)入到人和動(dòng)物體內(nèi)，它會(huì)引起人和動(dòng)物的很多病變，甚至死亡。世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)（InternationalAgencyfResearchonCancerIARC）劃定為I類致癌物。要從各個(gè)方面嚴(yán)格控制AFB1對(duì)人類食品和動(dòng)物飼料產(chǎn)生污染，將AFB1的危害降到最低，開(kāi)發(fā)新的高

3、靈敏的檢測(cè)AFB1的方法尤為重要。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，時(shí)間分辨熒光免疫分析方法(Timeresolvedfluoimmunoassay，TRFIA)得到了快速的發(fā)展，它具有沒(méi)有放射性污染、檢測(cè)靈敏度高、試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好等多種優(yōu)點(diǎn)，另外TRFIA能夠滿足大量樣品的檢測(cè)。本研究通過(guò)分析AFB1的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，先制備出人工抗原，再通過(guò)采集小鼠腹水的方法制備并純化得到單克隆抗體，成功制備出AFB1間接競(jìng)爭(zhēng)TRFIA試劑盒并對(duì)其性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)，

4、確立了常見(jiàn)樣品的快速處理方法，為AFB1快速檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用及推廣打下了基礎(chǔ)。采用N羥琥珀酰亞胺酯（NhydroxysuccinieNHS）法和碳二亞氨法（EDC）將AFB1偶聯(lián)于載體蛋白BSA上，合成人工抗原AFB1BSA。并利用紫外掃描法（UV）、SDSPAGE凝膠電泳試驗(yàn)及單克隆抗體等手段對(duì)人工抗原進(jìn)行了初步鑒定，結(jié)果顯示：人工抗原的紫外吸收峰包含AFB1及蛋白載體的紫外掃描特征峰，且在此基礎(chǔ)上出現(xiàn)了偏移；其分子量較載體蛋白也有所

5、增加；具有良好的免疫原性，從而充分說(shuō)明了AFB1人工抗原制備成功。采用稀土離子標(biāo)記技術(shù)，應(yīng)用單克隆抗體建立高靈敏的黃曲霉毒素Bl（AFB1）時(shí)間分辨熒光免疫分析法（AFB1TRFIA）。以AFB1BSA為免疫原制備抗AFB1抗體；AFB1與BSA的聯(lián)結(jié)物(AFB1BSA)為固相抗原，與游離AFB1共同競(jìng)爭(zhēng)有限的AFB1抗體；用Eu3標(biāo)記的羊抗鼠抗體作為二抗。該方法的靈敏度為0.0094μgL，測(cè)量范圍為0.0110gL，批內(nèi)和批間的變異