糧谷中的黃曲霉毒素(B1、B2、G1、G2)和赭曲霉毒素A聯(lián)合檢測研究.pdf

1、黃曲霉毒素(AFT)和赭曲霉毒素(OT)是真菌毒素中毒性最大的兩類毒素，1993年AFB1被國際癌癥研究機構(gòu)(IARC)列為一類致癌物，赭曲霉毒素中的赭曲霉毒素A(OTA)則被列為二類致癌物。AFT和OT不僅毒性強，而且污染范圍極廣，AFT對糧食和飼料的危害有不少報道，檢出率高達80％～100％，OT則被許多國家檢出大量污染糧食作物，更有資料表明AFT和OTA常常同時污染同一糧食作物，而且存在毒性的加性效應(yīng)，眾多國家和地區(qū)都已經(jīng)制定了A

2、FT和OTA嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。目前雖然AFT和OTA的分別測定方法已比較成熟，很多學(xué)者都做了大量的研究，但其分別測定成本較高，試劑損耗嚴(yán)重且測定耗時，工作量大。而對AFT和OT進行聯(lián)合檢測可有效解決上述問題，縮短分析時間，提高食品安全性。目前對食品、農(nóng)產(chǎn)品中AFT和OT等真菌毒素的單獨檢測方法主要有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法、熒光光度法、膠體金免疫層析法和高效液相色譜法等，但對其進行聯(lián)合檢測的報道較少，雖有少數(shù)文獻建立了其聯(lián)合檢測方法，但

3、其方法成本高，設(shè)備昂貴，不能在一般實驗室大面積推廣使用，因而受到限制。建立一套成本低，操作簡便、快速、凈化效果好的AFT和OTA聯(lián)合檢測方法，運用于糧食作物中的真菌毒素檢測，意義重大。
　　 本研究建立了糧谷中AFT和OTA的聯(lián)合檢測方法，樣品采用超聲波提取，液液萃取凈化，高效液相色譜-可變熒光波長檢測器測定。同時對方法的準(zhǔn)確度，精密度，靈敏度和線性范圍等進行研究，并與現(xiàn)行國標(biāo)方法進行比對實驗，主要結(jié)論如下：
　　 (1

4、)通過熒光分光光度計在200nm～700nm范圍內(nèi)全波段掃描，AFT的最大激發(fā)波長360nm左右，最大發(fā)射波長440nm左右；OTA最大激發(fā)波長333nm左右，最大發(fā)射波長477nm左右。經(jīng)過高效液相色譜-熒光檢測器檢測，AFT(衍生后)和OTA在液相色譜上有很強的熒光信號，而且每種毒素?zé)晒庑盘柕姆迕娣e和其對應(yīng)濃度都有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)都在0.999以上，說明通過液相色譜-熒光檢測器聯(lián)合檢測AFT和OTA是可行的。
　　

5、 (2)對提取過程中影響提取效果的各個因素進行了研究。確定取樣量為5g時，可以滿足提取回收率的要求，達到80％以上的回收率，變異系數(shù)為10％以內(nèi)；不同提取方式對固體樣品中AFT和OTA提取率影響很大，超聲波20℃處理20min時可以基本達到最大提取率，回收率在90％左右，檢測時間比國家標(biāo)準(zhǔn)振蕩處理縮短了近30min；實驗研究了提取劑的濃度，提取比對提取效果的影響，20mL80％甲醇溶液對5g樣品的提取率可以達到最大，回收率達到80％以

6、上；當(dāng)進行液液萃取時，第一次萃取后仍有少量毒素殘留在水相中，萃取不完全，回收率低，當(dāng)二次萃取后回收率顯著升高，毒素已基本萃取完全，所以實驗中進行多次萃取是必要的。
　　 (3)在玉米，大米，小麥三類樣品中加標(biāo)回收率平均為71.73％～115.37％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.00％～9.88％：經(jīng)連續(xù)日間和日內(nèi)7次精密度實驗，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.00％～9.30％，根據(jù)3倍信噪比的峰響應(yīng)值，確定AFB1、AFB2、AFG1、AFG2和OT

7、A檢出限分別為0.06、0.03、0.18、0.05、0.51μg/kg，上述五種毒素分別在濃度0.05～100.00、0.125～25.00、0.05～100.00、0.125～25.00、0.05～50.00μg/L范圍內(nèi)成線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9995、0.9996、0.9998、0.9992和0.9998；方法學(xué)驗證結(jié)果表明，AFB1、AFB2、AFG1、AFG2和OTA聯(lián)合檢測結(jié)果與現(xiàn)行國標(biāo)的單獨檢測方法檢測結(jié)果無顯著