伏馬菌素B1模擬表位的淘選及其免疫分析應(yīng)用研究.pdf

1、伏馬菌素B1是一種主要由串珠鐮刀菌、多育鐮刀菌等產(chǎn)生的真菌毒素,主要污染玉米及其制品。本研究以抗FB1單抗為靶分子,采用噬菌體展示技術(shù)篩選到了FB1模擬表位,并建立了基于FB1模擬表位的Phage-ELISA和基于多肽-BSA抗原的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA。研究?jī)?nèi)容如下:
　　 1、FB1模擬表位淘選、鑒定及測(cè)序
　　 以抗FB1單抗為靶分子,經(jīng)三輪淘選獲得了FB1模擬表位,經(jīng)測(cè)序并翻譯后得到三種序列:YGLPMLL、WELP

2、TLA、FELPTLP,共有序列為X-X-L-P-X-L-X,X為任意氨基酸。
　　 2、基于FB1模擬表位的Phage-ELISA分析法的建立
　　 以含有FB1模擬表位的噬菌體替代FB1標(biāo)品建立了Phage-ELISA,該法IC50為1.28 ng/mL,線(xiàn)性范圍為0.33～5.1 ng/mL,最低檢測(cè)限為0.21 ng/mL,批內(nèi)變異系數(shù)為3.7％,批間變異系數(shù)為7.5%,玉米加標(biāo)回收率為84.5～96.1%。

3、r>　　 3、基于多肽-BSA抗原的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA分析法的建立
　　 采用戊二醛一步法制備了多肽-BSA抗原,并建立了基于多肽-BSA抗原的idc-ELISA,該法IC50為6.06 ng/mL,線(xiàn)性范圍為1.77～20.73 ng/mL,最低檢測(cè)限為1.18 ng/mL,批內(nèi)變異系數(shù)為1.79%,批間變異系數(shù)為3.78%,玉米樣本加標(biāo)回收率為92.5～101.6%。
　　 對(duì)合成多肽進(jìn)行驗(yàn)證分析,結(jié)果表明模擬表位