骨橋蛋白在內毒素致大鼠急性肺損傷及損傷后肺纖維化中的作用.pdf

1、目的:通過觀察骨橋蛋白抗體(Anti-OPN-Ab)對內毒素腹腔注射所致的SD大鼠急性肺損傷及損傷后肺纖維化肺組織中核因子-κB(NF-κB)及炎性細胞因子腫瘤壞死因子(TNF-α)、干擾素γ(IFN-γ)、白細胞介素4(IL-4)、白細胞介素10(IL-10)表達水平的影響,探討骨橋蛋白在急性肺損傷及損傷后肺纖維化過程中的作用,進一步闡明肺損傷的發(fā)病機制。
　　方法:通過腹腔注射內毒素(LPS)建立大鼠急性肺損傷及損傷后肺纖維化

2、模型。60只清潔級雌性SD大鼠隨機分為3組,空白對照組(n=20,腹腔注射無菌生理鹽水NS),內毒素模型組(n=20,腹腔注射 LPS,5mg/kg),干預組(n=20,腹腔注射 LPS,5mg/kg,5分鐘后再次腹腔注射骨橋蛋白抗體0.5ml,效價為1:32)。在隨機分為3組的基礎上又按3d、7d、14d、28d不同時間點隨機分為4組,在0d、1d、2d連續(xù)用藥3天,共3次,建立肺損傷后肺纖維化模型。各組大鼠按上述時間點處死,留取標本

3、行相應檢測。①留取右肺下兩葉行Masson染色及HE染色,了解肺組織鏡下病理變化情況。②右肺上兩葉免疫印跡(Western blotting)檢測肺組織勻漿細胞漿與細胞核NF-κB的表達。③雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法(ELLISA)測定大鼠左肺肺組織勻漿炎癥細胞因子 TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10的表達。
　　結果:1、NS組大鼠肺組織HE染色光鏡下肺泡結構正常,無破壞,無炎性滲出物,肺間隔無增寬及炎性細胞浸潤。內毒素模型

4、組于3d組開始出現(xiàn)較重的炎癥反應即肺泡結構的破壞,肺泡腔閉陷融合,肺泡間隔斷裂,炎性細胞填充于肺泡腔及肺間質,并伴有出血、水腫,少許藍色膠原纖維開始沉積在炎癥較重的部位。7天組炎癥反應仍然很重,炎性細胞滲出明顯,更多的藍色膠原纖維沉積,14d組炎癥反應明顯減輕,28天時炎癥反應較前進一步減弱,但更多藍色膠原纖維出現(xiàn)在肺損傷部位。干預組上述病理表現(xiàn)均較內毒素組減輕。2、內毒素模型組及干預組大鼠肺組織勻漿細胞漿及細胞核NF-κB的表達在早期

5、就開始升高,與NS組比較具有明顯的統(tǒng)計學差異(p<0.01)且3d、7d組升高最明顯,但細胞漿NF-κB的表達在內毒素模型組與干預組之間無差異(p>0.05),而細胞核NF-κB的表達在兩者之間有顯著的統(tǒng)計學差異(p<0.01)。3、內毒素模型組及干預組大鼠肺組織勻漿在早期就可以出現(xiàn)致炎因子TNF-α、IFN-γ升高,同細胞核NF-κB表達量的升高在時間上存在一致性,仍然以3d、7d組最為明顯,兩組與NS組比較存在統(tǒng)計學差異(p<0.0

6、5, p<0.01)、后期炎性因子表達量逐漸減少,干預組在致炎因子TNF-α、IFN-γ表達量上較模型組有明顯下降(p<0.05,p<0.01)?？寡滓蜃覫L-4、IL-10在內毒素組及干預組之間仍然較 NS組有明顯升高(p<0.05,p<0.01),且與內毒素比較干預組升高更為明顯(p<0.05),但在14d時兩者之間無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　結論:多次小量腹腔注射LPS能夠成功復制急性肺損傷及損傷后肺纖維化模型,損傷