玉屏風總苷對肺纖維化大鼠的保護作用及部分機制研究.pdf

1、肺纖維化（pulmonary fibrosis，PF）是以細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）過度沉積為特點的慢性呼吸系統(tǒng)疾病。PF發(fā)病機制尚不明確，且缺乏有效治療藥物逆轉(zhuǎn) PF或阻斷其向呼吸衰竭進展。因此，進一步闡明 PF的發(fā)生機制、尋找防治PF的有效靶點和治療藥物仍是目前醫(yī)學界的研究熱點和臨床難題。
　　玉屏風散由黃芪、白術(shù)、防風三味中藥組成，是中醫(yī)經(jīng)典方劑，可預防和治療呼吸道病毒感染，抑制慢性支氣管

2、炎。本課題組前期研究結(jié)果顯示其有效部位玉屏風總苷（total glucosides from Yupingfeng，YTG）有抗炎和免疫調(diào)節(jié)活性，且黃芪甲苷（YTG組成成分之一）能抑制高遷移率組蛋白B1（high-mobility group box1，HMGB1）的活性、減少膠原分泌，減輕心肌纖維化和肝纖維化。然而，YTG對PF是否具有保護作用尚未見報道。
　　目的：本項目擬通過博來霉素A5（bleomycin A5，BLM）誘

3、導的PF大鼠模型，探究YTG對PF的保護作用及其部分機制。
　　方法：將120只雌性SD大鼠隨機分為生理鹽水（normal saline，NS）組、博來霉素A5組（BLM）、強的松（prednisone，Pred）組、玉屏風湯劑（Yupingfeng Decoction，YD）組、玉屏風總苷（YTG）-低劑量組和YTG-高劑量組。采用氣管內(nèi)一次性滴注BLM（5 mg/kg）復制PF大鼠模型，NS組大鼠滴注等體積生理鹽水。造模第2

4、d開始，連續(xù)給予相應治療組大鼠以5 mg/kg/d Pred、2.8 g/kg/d YD和5、10 mg/kg/d YTG灌胃28 d。在造模后第0、7、14、28天記錄各組大鼠體重變化。分別在第14 d、28 d處理各組大鼠一半，收集血液（分離血清）和肺組織，全肺稱重（觀察肺系數(shù)的變化），然后進行以下實驗：（1）通過肺組織切片的H&E染色和Masson膠原染色觀察YD和YTG（5 mg/kg/d）干預對大鼠肺泡炎和PF程度的影響，同時

5、測定肺組織中的羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）含量；（2）檢測YTG（5、10 mg/kg/d）干預組肺勻漿中的?型膠原（type?collagen，Col-?）含量和血清中層粘連蛋白（laminin，LN）、透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、HMGB1水平；（3）采用免疫組化（immunohistochemistry，IHC）分析觀察YTG干預后HMGB1、E-鈣黏素（E-cadherin，E-cad）

6、和α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表達情況；（4）采用Western blot分析檢測YTG干預對大鼠肺組織中HMGB1、E-cad、α-SMA和波形蛋白（vimentin，Vim）表達的影響。
　　結(jié)果：玉屏風湯劑（2.8 g/kg/d）和YTG（5 mg/kg/d）可不同程度減輕BLM引起的大鼠肺泡炎和PF程度、降低肺系數(shù)、抑制大鼠體重的降低、減少 HYP含量，以YTG（5 mg/

7、kg/d）的作用較為明顯。同時，YTG（5、10 mg/kg/d）也能不同程度降低 BLM誘導的 Col-Ⅰ、LN、HA和HMGB1水平，下調(diào)肺組織中HMGB1的表達水平和間質(zhì)細胞標志蛋白α-SMA、Vim的蛋白表達，上調(diào)上皮細胞標志物E-cad的蛋白水平，尤其是YTG（10 mg/kg/d）組。
　　結(jié)論：
　　1. YTG（5 mg/kg/d）和YD（2.8 g/kg/d）能不同程度減輕BLM誘導的大鼠PF，且前者的抗P