眼鏡蛇毒灌胃后的兔血清對肝癌的抑瘤及促凋亡作用.pdf

1、　　目的：研究眼鏡蛇毒灌胃后的兔血清(the serum of rabbit taking orally cobra venom,SRCV)對肝癌的體內(nèi)外抑瘤作用和誘導(dǎo)凋亡作用,并評價(jià)其安全性。
　　實(shí)驗(yàn)方法：根據(jù)血清藥理學(xué)方法,制備SRCV,以人肝癌HepG-2細(xì)胞及正常人胚肺成纖維細(xì)胞為靶細(xì)胞,以小鼠肝癌移植瘤為動物模型,通過臺盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)、在體抑瘤實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀分析、電鏡觀察、TUNEL測試等實(shí)驗(yàn)方法,觀察該制劑對肝癌的體

2、內(nèi)外抑瘤及在體促凋亡作用。通過急性毒性實(shí)驗(yàn)和半數(shù)有效量測定評價(jià)其安全性。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1)高、低劑量SRCV各組的細(xì)胞毒作用均顯著強(qiáng)于同濃度正常血清(P<0.01),其中5mg/ml劑量組的增殖抑制率均高于5μg/ml阿霉素(P<0.01)；而高劑量SRCV的抑制率略高于同濃度低劑量SRCV,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。同時,高劑量SRCV(5mg/ml)有顯著的抗腫瘤細(xì)胞增殖作用,其作用與15μg/ml阿霉素相近。2)SRCV及正常兔血

3、清各劑量組對人胚肺成纖維細(xì)胞有不同程度促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,而前者促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用更強(qiáng),其中1、2、5mg/ml劑量組與同濃度正常兔血清比較具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。3)急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果,SRCV的急性毒性最小,經(jīng)酸熱處理后蛇毒的毒性比眼鏡蛇毒原毒也有所下降,其LD50均有非常顯著性差異(P<0.01)。以三者LD1的1/3量給藥進(jìn)行的抑瘤實(shí)驗(yàn),均有顯著抑瘤作用(P<0.01),其中SRCV的抑瘤率最高,經(jīng)酸熱處理后蛇毒的抑瘤效果與

4、原毒相似。SRCV的半數(shù)有效量測定結(jié)果及其相對毒性參數(shù),說明它的相對毒性較低。4)流式細(xì)胞儀分析及TUNEL測試表明SRCV使小鼠肝癌移植瘤的凋亡率顯著升高,而電鏡下觀察可見典型凋亡細(xì)胞,光鏡下觀察TUNEL處理的組織切片也可見凋亡細(xì)胞。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)論：1)SRCV對腫瘤細(xì)胞具高度選擇性抑制作用,且其細(xì)胞毒作用與抑制腫瘤細(xì)胞的增殖有關(guān)；而對正常增殖細(xì)胞,不但不抑制,還能促進(jìn)細(xì)胞增殖。2)SRCV較原毒的毒性降低,但仍