廣西眼鏡蛇毒中NGF和Natrin的分子生物學(xué)及性質(zhì)研究.pdf

1、目的：對來源于廣西眼鏡蛇毒的神經(jīng)生長因子(NGF)蛋白的基因進(jìn)行體外擴(kuò)增、克隆及序列分析，并表達(dá)。研究廣西眼鏡蛇毒神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)人類小涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞(NACC)凋亡的影響。方法：采用Trizol法從廣西眼鏡蛇毒腺中提取總RNA，經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增出廣西眼鏡蛇毒中的NGF的cDNA，測序后與其它來源的NGF比較同源性；將來源于廣西眼鏡蛇毒的NGF蛋白的基因克隆至融合表達(dá)載體pET-40b(+)中，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中，

2、經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出NGF。利用蛋白印跡分析其是否有NGF抗原活性及用PCI2細(xì)胞進(jìn)行生物活力測定并通過細(xì)胞計數(shù)法與天然蛇毒NGF的活性比較。應(yīng)用HE染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率的變化。結(jié)果：廣西眼鏡蛇毒中的NGF可在大腸桿菌中克隆和表達(dá)。DNA軟件分析其有110 Amino Acids，Molecular Weight為12346.93 Daltons，等電點為7.643。經(jīng)蛋白印跡分析可知其具有NGF抗原活性，P