華支睪吸蟲(chóng)AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文華支睪吸蟲(chóng)AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究專(zhuān)業(yè)：姓名：導(dǎo)師：病原生物學(xué)楊光余新炳教授教授教授教授教授教授教授教授教授2005年4月25日廣州本項(xiàng)目獲廣東省自然科學(xué)團(tuán)隊(duì)等基金資助華支墨吸蟲(chóng)AK3和LDH新基因的克隆與功能特征研究中山大學(xué)博士學(xué)位論文乳酸脫氫酶廣泛分布在細(xì)菌、植物和動(dòng)物之中。在脊椎動(dòng)物中，乳酸脫氫酶是由四個(gè)亞單位組成的四聚體，其亞單位有3個(gè)獨(dú)立的基因座LDH—A。一B，一e基因所編碼。乳酸脫氫酶(

2、LDH)是糖代謝中的一個(gè)非常重要的酶，在NADH輔酶I存在的條件下能催化丙酮酸和乳酸之削相互轉(zhuǎn)化。乳酸脫氫酶的作用還有，在哺乳動(dòng)物的過(guò)氧化物酶體中，LDH與B氧化系統(tǒng)相偶聯(lián)并與NADH的再氧化有關(guān)。糖代謝酶被認(rèn)為是吸蟲(chóng)生命能夠存活的關(guān)鍵分子，已經(jīng)被作為靶標(biāo)進(jìn)行疫苗研究的重要分子。從應(yīng)用上講，乳酸脫氫酶在寄生蟲(chóng)感染和一些疾病的診斷中有一定的意義。通過(guò)顯微鏡檢和臨床癥狀確診的病人或者復(fù)發(fā)感染瘧原蟲(chóng)者，從其血液中可檢測(cè)到LDH的活性。在無(wú)脊椎

3、動(dòng)物中，乳酸脫氫酶催化丙酮酸和乳酸之間相互轉(zhuǎn)化的特性研究還不深入。研究目的確定華支睪吸蟲(chóng)AK3的cDNA和其編碼蛋白的分子特征包括：酶活性、最適pH、最適溫度、動(dòng)力學(xué)參數(shù)、底物特異性、酶活性的抑制劑和其二級(jí)結(jié)構(gòu)，了解華支睪吸蟲(chóng)核苷酸代謝方面的特征。確定華支睪吸蟲(chóng)LDH的cDNA和其編碼蛋白的分子特征、酶活性、最適pH、最適溫度、動(dòng)力學(xué)參數(shù)、底物特異性、會(huì)屬離子對(duì)其活性的影響、酶抑制劑、二級(jí)結(jié)構(gòu)、及蛋白結(jié)晶條件，了解華支睪吸蟲(chóng)糖代謝方面的

4、特征。研究方法從華支睪成蟲(chóng)的eDNA文庫(kù)中通過(guò)大規(guī)模測(cè)序克隆新基因，利用NCBl(http：／／wwwnlmnihgov／BLAST)網(wǎng)站的BLASTN，BLASTP去除序列中的載體部分并在DNA和氨基酸水平上進(jìn)行同源性分析。開(kāi)放讀碼框采用ORFfinder(http：／／wwwnlmnihgov／gorf／gorfhtml)程序預(yù)測(cè)。尋找完整閱讀框的起始密碼子和終止密碼子。蛋白分析用蛋白組學(xué)序列分析工具采用SWISS—MODELRep