華支睪吸蟲gst2cstp22.3基因的克隆表達及其免疫學功能初步研究

1、中山大學碩士學位論文華支睪吸蟲GST2-CsTP22.3基因的克隆表達及其免疫學功能初步研究姓名：李彩霞申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：余新炳20090605中山大學碩士學位論文 華支睪吸蟲G S T 2 ．C s T P 2 2 ．3 基因克隆表達及其免疫學功能初步研究粗抗原是免疫診斷試劑盒研制的必然趨勢，關于華支睪吸蟲免疫診斷抗原的篩選和評價是國內(nèi)外華支睪吸蟲病研究的重點。華支睪吸蟲表膜脫落分子可以進入血液循環(huán)，刺激

2、宿主產(chǎn)生抗體，而且與宿主肝膽管直接接觸的蟲體表膜抗原可以引起局部粘膜反應，因此表膜抗原在華支睪吸蟲免疫、致病中有重要作用。本實驗室前期通過間接E L I S A 方法評價6 種華支睪吸蟲重組蛋白的免疫診斷價值，發(fā)現(xiàn)華支睪吸蟲成蟲谷胱甘肽轉移酶2 ( G S T 2 ) 的特異性比較高，但敏感性仍不甚理想。隨著基因工程技術的進展，可以根據(jù)需要對基因進行連接以提高重組抗原的診斷敏感性。為此，我們利用生物信息學技術，對本室構建的華支睪吸蟲成蟲

3、c D N A 文庫進行篩選，從中挑選具有診斷價值的表膜蛋白基因，將其與G S T 2 構建融合蛋白，并對融合蛋白的診斷價值進行初步驗證，期望為華支睪吸蟲病的診斷做出積極有益的探索。研究目的識別、克隆華支睪吸蟲成蟲谷胱甘肽轉移酶2 ( G S T 2 ) 及表膜蛋白( T P 2 2 ．3 ) ，并將G S T 2 和T P 2 2 ．3 共同克隆至U p E T 一3 2 a ( + ) 載體上，構建融合蛋白。通過間接E L I S

4、A方法評價該融合蛋白檢測華支睪吸蟲病流行區(qū)的正常血清、感染血清中的I g G 4 亞類的敏感性和特異性，為華支睪吸蟲免疫診斷抗原的篩選探索新的途徑。研究方法1 ．T P 2 2 ．3 基因的生物信息學分析華支睪吸蟲成蟲c D N A 質粒文庫進行表達序列標簽( e x p r e s s i o n s e q u e n c e t a g ，E S T ) 隨機測序和u n i g e n e 歸并、拼接，獲得多個華支睪吸蟲成蟲全長