首烏益智膠囊對(duì)血管性認(rèn)知障礙的促血管新生作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:1.觀察首烏益智膠囊對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成的影響,及對(duì)VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影響,從而驗(yàn)證首烏益智膠囊是否能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞血管新生,并探討其可能機(jī)制。2.通過觀察首烏益智膠囊對(duì)血管性認(rèn)知障礙模型大鼠缺血腦組織微血管密度的影響,探討首烏益智膠囊促血管新生的療效。3.觀察首烏益智膠囊對(duì)大鼠缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA表達(dá)的影響,探討首烏益智

2、膠囊促進(jìn)具有穩(wěn)定功能的血管新生的信號(hào)調(diào)控機(jī)制。方法:1.培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、尼莫地平組(尼莫地平含藥血清)、首烏益智膠囊組(首烏益智膠囊含藥血清),分組用藥,采用MTT法、劃痕損傷實(shí)驗(yàn)、管樣結(jié)構(gòu)生成實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和管樣結(jié)構(gòu)生成;采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)HUVECs細(xì)胞VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA表達(dá)。2.以Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用大腦中動(dòng)脈缺血再灌注法建立血管性認(rèn)知障礙

3、動(dòng)物模型。將造模成功大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、尼莫地平組(0.81mg/100g/d)、首烏益智膠囊組(54mg/100g/d),每組20只,造模后藥物干預(yù)4周,Morris水迷宮試驗(yàn)檢測(cè)各組大鼠行為學(xué)改變,免疫組化檢測(cè)CD34表達(dá)觀察缺血周圍腦組織微血管密度的改變,電鏡觀察腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因表達(dá)。結(jié)果:1.離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)首烏益智膠囊

4、對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成的影響:首烏益智膠囊組OD值為0.99±0.03,明顯高于空白對(duì)照組的0.54±0.02(p＜0.01);首烏益智膠囊組遷移率為94.83％,明顯高于空白對(duì)照組的70.94%(p＜0.01);高倍視野(200×)隨機(jī)計(jì)算6個(gè)視野下形成的管腔個(gè)數(shù),首烏益智膠囊為23.42±2.83,明顯高于空白對(duì)照組的15.23±3.44(p＜0.01)。(2)首烏益智膠囊對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VEGF、Ang-1、

5、Tie-2、Notch4mRNA的影響:空白對(duì)照組、尼莫地平組、首烏益智膠囊組的VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA水平依次升高。與空白對(duì)照組比較,尼莫地平組和首烏益智膠囊組有顯著性差異(p＜0.01, p＜0.05);與尼莫地平組比較,首烏益智膠囊組Ang-1、Notch4mRNA表達(dá)有顯著性差異(p＜0.05),首烏益智膠囊組VEGF、Tie-2mRNA表達(dá)無顯著性差異(p＞0.05)。2.在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)首烏益

6、智膠囊對(duì)VCI模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響:水迷宮結(jié)果表明,首烏益智膠囊組大鼠的定位航行和空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)試成績(jī)明顯優(yōu)于模型組和尼莫地平組(p＜0.01, p＜0.05)。(2)首烏益智膠囊對(duì)缺血周圍腦組織微血管密度的影響:模型組、尼莫地平組、首烏益智膠囊組較假手術(shù)組依次升高;各組與假手術(shù)組相比,有顯著性差異(p＜0.01,p＜0.05);與模型組比較,尼莫地平組、首烏益智膠囊組有顯著性差異(p＜0.01, p＜0.05);與尼莫地平組比較

7、,首烏益智膠囊組差異無顯著性(p＞0.05)。(3)首烏益智膠囊對(duì)VCI模型大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響:模型組缺血側(cè)微血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)以及毛細(xì)血管周圍高度水腫,血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)目減少,線粒體的大部分嵴融合消失,部分核膜融合消失。首烏益智膠囊組和尼莫地平組:鏡下表現(xiàn)較模型組均有明顯改善,毛細(xì)血管周圍水腫較模型組輕,基膜基本正常,血管內(nèi)皮細(xì)胞可見較多的線粒體,已接近正常狀態(tài)。以首烏益智膠囊組對(duì)內(nèi)皮水腫改善最為顯著。(4)首烏益智

8、膠囊對(duì)VCI模型大鼠缺血腦組織VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA的影響:模型組VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4、DLL4mRNA水平較假手術(shù)組大鼠升高,差異有顯著性(p＜0.05)。尼莫地平組和首烏益智膠囊組VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4mRNA水平與模型組有明顯升高(p＜0.01, p＜0.05);首烏益智膠囊組VEGF、Ang-1、Notch4mRNA表達(dá)升高,與尼莫地平組相比存在顯

9、著性差異(p＜0.05);首烏益智膠囊組Tie-2mRNA表達(dá)升高,與尼莫地平組相比無顯著性差異(p＞0.05)。結(jié)論:1.首烏益智膠囊能促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、管狀結(jié)構(gòu)形成,從而具有促進(jìn)血管新生的療效。首烏益智膠囊可能通過上調(diào)VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因的表達(dá)發(fā)揮促血管新生的療效。2.首烏益智膠囊能明顯提高VCI模型大鼠缺血腦組織微血管密度,促進(jìn)血管新生。VEGF、Ang-1、Tie-2、Notch4基因