病理性瘢痕中粘著斑激酶、磷酸化蛋白激酶B和核因子κB的表達.pdf

1、病理性瘢痕(pathologic scar,PS)是真皮損傷后組織異常修復的結果。它發(fā)生在創(chuàng)傷、感染、燒傷后，以成纖維細胞(fibroblast，F(xiàn)Bs)的過度增生和細胞外基質(extracellular matrix，ECM)的過度沉積為特征。臨床表現(xiàn)為疼痛、騷癢、瘤樣增生并伴有不同程度的功能障礙。病理性瘢痕的病因和發(fā)病機制尚未明了，目前尚無行之有效的治療方法。 近年來，隨著現(xiàn)代細胞生物學和分子生物學在瘢痕領域的深入研究，從而

2、進一步認識了病理性瘢痕的生物學基礎：即修復細胞(主要是FBs)的大量增殖與凋亡抑制、ECM中膠原合成與降解失衡、部分細胞因子的大量產生及其三者之間的密切關系。病理性瘢痕FBs的生物學行為是探索其發(fā)病機制的重點，信號傳導通路激活使FBs大量增殖在纖維化疾病中的意義已引起關注。 粘著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)是一種非受體型的酪氨酸蛋白激酶，主要參與整合素介導的信號傳導。整合素激活FAK后進入磷脂酰肌

3、醇-3-激酶(phosphatedylinositol-3 kinase，P13K/AKT)途徑。蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)作為P13K途徑直接的靶蛋白，在該信號系統(tǒng)中起著關鍵作用，磷酸化蛋白激酶B(phosphor-protein kinase B，P-PKB)為其活化形式，具有促進細胞增殖、對抗細胞調亡、調節(jié)細胞周期等多種生物學功能。核因子KB(nuclear factor KB，NF-KB)是一種具有多

4、向性調節(jié)作用的轉錄因子，對細胞內許多基因的表達起著關鍵性的調控作用。為PKB的下游信號蛋白，在外來信號刺激下，抑制性蛋白IKB降解，NF-KB從其復合物中解離，才能進入細胞核，與胞核內特定的DNA序列，發(fā)揮其轉錄調節(jié)作用。已有研究表明，病理性瘢痕的發(fā)生發(fā)展與FBs表面整合素的過度表達密切相關。P13K是整合素介導的信號傳導途徑之一，整合素介導的P13K途徑在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用已被證實。在腫瘤基質和病理性瘢痕中都伴有整合素的過度表達。研

5、究P13K途徑在病理性瘢痕中的表達與病理性瘢痕發(fā)生發(fā)展的關系，將有助于揭示病理性瘢痕發(fā)生的機制，為預防和臨床治療提供依據(jù)。 本課題利用免疫組化染色技術，探討FAK、P-PKB和NF-κB在病理性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮膚中的表達情況及其相互關系，旨在揭示P13K途徑與病理性瘢痕形成的關系，以便為預防和治療病理性瘢痕提供新的思路。 材料與方法 選用整形外科手術切除的病理性瘢痕、非病理性瘢痕，取材部位為面、頸、胸或

6、四肢等。正常皮膚取自皮膚移植供皮區(qū)的全厚皮膚，取材部位為四肢、腹部或背部等。所有標本均有詳細的完整病歷和隨訪記錄、均未行放療、激光或免疫等治療并經(jīng)病理證實。瘢痕疙瘩10例，增生性瘢痕30例為病理性瘢痕組，其中男22例，女18例，年齡2～65(20.8±9.1)歲，病程0.6～6.0(2.3±1.4)年；非病理性瘢痕20例，男10例，女10例，年齡3～50(21.5±11.3)歲，病程0.5～5.0(2.3±1.6)年；正常皮膚20例，男

7、12例，女8例，年齡2～64(23.5±11.6)歲。本課題采用免疫組化染色技術(SP法)，分別檢測P13K途徑中的FAK、p-PKB和NFKB在病理性瘢痕、非病理性瘢痕及正常皮膚中的表達情況，并探討在病理性瘢痕中FAK、p-PKB和NF-κB表達的相互關系。所測數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計分析，以α=0.05為檢驗水準。 結果 1.FAK蛋白免疫組化結果病理性瘢痕中膠原結節(jié)、漩渦狀結構中的大部分FBs胞漿陽性著

8、色，陽性表達率為65.00％(26/40)。非病理性瘢痕組織中部分FBs胞漿陽性，著色較淡，陽性表達率為35.00％(7/20)。正常皮膚組織中FBs中FAK蛋白陽性表達率為25.00％(5/20)。病理性瘢痕與非病理性瘢痕、正常皮膚比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。非病理性瘢痕與正常皮膚比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2.p-PKB蛋白免疫組化結果病理性瘢痕中p-PKB主要表達于FBs胞漿，陽性信號主要集中在膠原結

9、節(jié)、漩渦狀結構中，陽性表達率67.50％(27/40)。部分血管內皮細胞和皮膚基底層細胞胞漿亦呈陽性。在非病理性瘢痕的FBs胞漿中部分表達，陽性表達率40.00％(8/20)。正常皮膚中則大多缺乏表達，陽性表達率20.00％(4/20)。病理性瘢痕與非病理性瘢痕、正常皮膚比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。非病理性瘢痕與正常皮膚比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3.NF-κB蛋白免疫組化結果NF-κB在細胞胞漿或/和胞核

10、著色均呈棕黃色為陽性標志。病理性瘢痕膠原結節(jié)、漩渦狀結構中的大部分FBs胞核或/和胞漿陽性著色，陽性表達率為72.50％(23/40)。大部分血管內皮細胞和基底層細胞亦呈陽性。非病理性瘢痕組織中部分FBs胞漿或/和胞核陽性，陽性表達率為40.00％(8/20)。正常皮膚組織中NFrJ3蛋白主要分布于少部分FBs、表皮基底層細胞、毛細血管內皮細胞胞漿或/和胞核中，F(xiàn)Bs陽性表達率為35.00％(7/20)。病理性瘢痕與非病理性瘢痕、正常皮

11、膚比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。非病理性瘢痕與正常皮膚比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 4.FAK的表達與p-PKB、NF-κB表達關聯(lián)性分析病理性瘢痕組中，F(xiàn)AK表達與p-PKB蛋白表達、FAK蛋白表達與NFRB蛋白表達、FAK表達與NF-κB蛋白表達均有正相關性(P<0.05)。 結論 1.FAK在病理性瘢痕中FBs胞漿中呈高表達，提示一些細胞因子(TGF，PDGF等)可能通過刺激FBs表面整合

12、素的表達并使局部FAK酪氨酸磷酸化而激活，F(xiàn)AK進一步激活下游信號傳導(Ras/MAPK途徑，P13K途徑)，促進FBs的異常增殖，參與病理性瘢痕的形成。 2.p.PKB在病理性瘢痕中表達上調，可能通過激活各種因子參與了FBs的分化、增殖或對細胞因子的調控，抑制其凋亡，促進病理性瘢痕形成。 3.NF-κB在病理性瘢痕中高表達，可能通過促進bcl-2、C-myc、Cyclin D1基因表達、促進抑制死亡受體(DR)凋亡途徑