認(rèn)知障礙對大鼠炎癥性疼痛的影響.pdf

1、目的：臨床醫(yī)學(xué)調(diào)查顯示，癡呆病人對疼痛的感覺可能與常人不同。由于癡呆病人存在認(rèn)知障礙，臨床上難以對其程度進(jìn)行量化和準(zhǔn)確評估，這導(dǎo)致臨床上忽視或沒有正確的治療癡呆病人的疼痛及相關(guān)病癥，加重了癡呆病人的抑郁程度和睡眠紊亂，進(jìn)一步使癡呆病人的病情加重，照顧者負(fù)擔(dān)加重。本課題擬從基礎(chǔ)研究的角度揭示認(rèn)知障礙和疼痛之間存在的客觀聯(lián)系，為臨床制定客觀、完善、準(zhǔn)確的反映癡呆病人疼痛的評估方法提供客觀的依據(jù)和指導(dǎo)。
　　 方法：
　　 1

2、.通過將Aβ1-40/1-42混合溶液(10 μg/5 μl)注入到雙側(cè)海馬的CA1區(qū)來構(gòu)造類似AD動物模型的大鼠認(rèn)知障礙模型。
　　 2.應(yīng)用行為學(xué)方法評價動物運(yùn)動功能。
　　 3.利用Morris水迷宮篩選出認(rèn)知存在障礙的動物。
　　 4.向篩選出的大鼠右側(cè)脛跗關(guān)節(jié)注射50μl完全弗氏佐劑(CFA)以誘發(fā)炎癥性疼痛模型，并進(jìn)行熱刺激痛閾值和機(jī)械刺激痛覺閾值的測定。
　　 5.為進(jìn)一步驗證認(rèn)知障礙(老年

3、性癡呆)與疼痛之間的關(guān)系，本研究先采用CFA佐劑注射到大鼠的右側(cè)脛跗關(guān)節(jié)以誘發(fā)炎癥性疼痛動物模型。
　　 6.將放線菌酮(一種蛋白合成阻斷劑)注入大鼠雙側(cè)海馬的CA1區(qū)來干擾CFA對大鼠已經(jīng)造成的疼痛記憶。
　　 7.利用Morris水迷宮對動物的記憶水平進(jìn)行評估。同時，對經(jīng)過相同手術(shù)處理的另兩組動物進(jìn)行熱刺激痛閾值和機(jī)械刺激痛覺閾值的測定。
　　 8.檢測海馬及腰椎脊髓中Ab、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶ChaT、N-甲基-

4、D-天冬氨酸受體NMDAR1、蛋白激酶PKCγ的表達(dá):通過免疫組織化學(xué)方法檢測各組大鼠海馬及脊髓中Ab、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表達(dá)情況。
　　 9.檢測海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核和腰椎脊髓中Ab、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表達(dá):通過Western Blot方法檢測各組大鼠海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核和腰椎脊髓中Ab、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.在

5、整個試驗過程中，所有經(jīng)歷過手術(shù)的動物都能正常行走并擁有健康的步態(tài)。
　　 2.在Morris水迷宮實(shí)驗中，AD模型組動物的逃避潛伏期明顯比Na?ve組、ACSF組長。
　　 3.注射過CFA的大鼠右足和未注射CFA的相比，其熱痛閾值和機(jī)械痛覺閾值明顯減小，但AD/CFA組和AD/Veh組之間、ACSF/CFA組和AD/CFA組之間具有顯著性差異。
　　 4.Morris水迷宮結(jié)果表明放線菌酮組動物的逃避潛伏期明顯

6、比生理鹽水組動物的長。
　　 5.放線菌酮組與生理鹽水組相比，放線菌酮組動物的熱痛閾值和機(jī)械痛覺閾值明顯增加。
　　 6.免疫組織化學(xué)結(jié)果：AD模型組動物海馬中檢測出Ab沉積明顯增多，而Na?ve組和ACSF組動物的海馬中幾乎檢測不到Aβ的沉積。AD模型組動物的海馬中ChaT的表達(dá)和其他組動物的相比，明顯減少。全部CFA佐劑組與Na?ve組、vehcile組相比，CFA佐劑注射組動物的海馬及腰椎脊髓中NMDAR1的表達(dá)明

7、顯增加。AD/CFA組和ACSF/CFA組相比，前組動物NMDAR1的表達(dá)量略有減少。全部CFA佐劑注射組動物的海馬中PKCγ的表達(dá)與對照組相比顯著增加，ACSF/CFA組動物的海馬中PKCγ的表達(dá)與AD/CFA組相比增加更為顯著。
　　 7.Western Blot結(jié)果：Aβ在AD模型組動物中的表達(dá)與Na?ve、ACSF兩組相比，Western Blot的結(jié)果和免疫組織化學(xué)的結(jié)果基本保持一致。與Na?ve、全部ACSF組相比，

8、ChaT在全部AD模型組動物的對側(cè)、同側(cè)海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核的表達(dá)都出現(xiàn)明顯的下調(diào)。NMDAR1在ACSF/CFA、AD/CFA兩組動物的對側(cè)、同側(cè)海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核的表達(dá)與在它們各自相應(yīng)的對照組相比，其表達(dá)量明顯上調(diào)。但是，NMDAR1在AD/CFA組的表達(dá)與ACSF/CFA組相比，表達(dá)量略有減少。PKCγ在ACSF/CFA、AD/CFA兩組動物的對側(cè)、同側(cè)海馬、丘腦、基底神經(jīng)節(jié)、杏仁核的表達(dá)與它們各自的對照組相

9、比較，其表達(dá)量顯著增加。但是，PKCγ在AD/CFA組的表達(dá)明顯少于ACSF/CFA組。
　　 結(jié)論：
　　 1.認(rèn)知障礙與大鼠疼痛反應(yīng)存在緊密的關(guān)聯(lián)，認(rèn)知障礙的動物對疼痛的熱刺激與機(jī)械刺激較不敏感。
　　 2.放線菌酮注射造模，能明顯干擾動物的空間記憶鞏固過程，此種認(rèn)知存在缺損的動物對疼痛的熱刺激和機(jī)械刺激與對照組動物相比，痛覺表現(xiàn)不明顯。
　　 3.本研究的結(jié)果提示，存在認(rèn)知障礙的動物在炎癥性疼痛的刺