殼聚糖-聚乙烯亞胺構建新型非病毒基因載體及其評價.pdf

1、目的：依據(jù)載體材料聚乙烯亞胺(PEI)和殼聚糖的自身特點，構建PEI修飾的殼聚糖，并進一步連接靶向性多肽，通過物理化學和生物學手段評價新型載體的基本性能、基因轉染效率、安全性與體內藥效。
　　 方法：⑴孵育法制備PEI/殼聚糖/DNA納米粒，考察不同N/P下納米粒的形態(tài)、粒徑、分布及與DNA的結合程度。MTT法考察對HeLa細胞的毒性，轉染試驗考察復合納米粒的轉染效率，以獲得PEI，殼聚糖，DNA的最佳配比。⑵合成法制備PEI/

2、殼聚糖新型材料(CP)?？疾觳牧霞凹{米粒在HeLa、A549、HepG2三種細胞的毒性。測定納米粒的粒徑，電位及凝膠電泳下與DNA的結合程度.采用蟲熒光素酶質粒pGL3及綠熒光蛋白EGFP質?？疾霤P在HeLa、A549、HepG2三種細胞的轉染，并考察其入胞機制。⑶合成法制備靶向性多肽/PEI/殼聚糖新型材料(CPT)，考察其在不同細胞上轉染效率的差異及加入多肽后的競爭性抑制實驗。⑷將CP，CPT攜載趨化性細胞因子CCL22質粒和白介

3、素IL—12質粒。分別采用ex vivo和in vivo的方法，考察載體攜載治療基因對H22鼠源肝腫瘤的抑制效果。
　　 結果：當PEI/殼聚糖/DNA的N/P為10:4：1時，孵育法制得的復合納米粒有較高的生物安全性及轉染效率，且血清對復合納米粒轉染效果影響不大。通過合成反應成功地將小分子PEI連接在殼聚糖上形成新型材料，此材料在三種細胞上均未顯示毒性，與PEI25KDa相比，能夠長時間地高效轉染。結果顯示CP/DNA的入胞為