RhoE基因與原發(fā)性下肢深靜脈瓣膜功能不全關(guān)系的初步研究.pdf

1、靜脈疾病一直以來都是危害人類身體健康的常見疾病之一。近年來，隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高、飲食習慣的改變，靜脈疾病的發(fā)病率日漸升高，對靜脈疾病的診治在血管外科甚至在整個外科領(lǐng)域占有越來越重要的地位。原發(fā)性下肢深靜脈瓣膜功能不全(Primarydeepveinvalveinsufficienoy，PDVI)是一種十分常見的靜脈疾病，大約占血管外科靜脈疾病的超過一半以上。 PDVI的原發(fā)性病理改變主要包括兩個方面：1、股淺靜脈

2、瓣膜發(fā)育缺陷，靜脈瓣膜缺失、畸形或延長下垂使得瓣膜關(guān)閉不完全；2、瓣膜區(qū)靜脈管壁松弛、擴張導致相對性的瓣膜管壁不全。然而，靜脈瓣膜或管壁發(fā)生的這些形態(tài)學上的改變究竟是由什么原因引起的、涉及哪些具體分子機制?迄今為止人們對此的了解還十分有限。 在對PDVI相關(guān)基因的研究中，我們發(fā)現(xiàn)多個差異表達的來源于已知或未知基因的cDNA片段，部分已經(jīng)得到Northernblotting和半定量RT-PCR證實，表明這些基因確實參與了PDVI的

3、發(fā)生或發(fā)展。其中一個548bp長的cDNA片段(NO.15克隆)在病變的靜脈壁組織中高度表達，序列分析表明該片段與Homosapiensrashomologgenefamily,memberE(RhoE)基因有高度的同源性。但究竟是來源于RhoE基因本身，還是RhoE基因的變異?其蛋白產(chǎn)物究竟在血管平滑肌的病理改變中發(fā)揮什么樣的作用?還需要對其進行深入研究。 RT-PCR等技術(shù)的飛速發(fā)展，為研究疾病發(fā)生過程中基因表達的變化提供了

4、方便快捷的方法。本課題采用RT-PCR技術(shù)探討PDVI病人大隱靜脈管壁組織中RhoE基因表達的變化情況，同時對擴增出來的cDNA片段進行克隆、測序鑒定及序列分析，來初步探討RhoE基因與PDVI的關(guān)系，將為最終闡明該基因的功能和在PDVI發(fā)病中的作用，進而了解其上游和下游分子機制奠定基礎(chǔ)。 材料和方法以原發(fā)性下肢深靜脈瓣膜功能不全并大隱靜脈瓣膜功能不全患者手術(shù)中切除的功能不全大隱靜脈的隱-股瓣膜區(qū)管壁組織為病例組標本，以非血管病

5、死亡病人的正常大隱靜脈相應部分組織為對照組標本。所有病例均經(jīng)過血管彩超和靜脈造影確診，所有組織標本經(jīng)病理切片檢查確認。用TrizolReagent試劑提取組織總RNA；采用RT-PCR技術(shù)研究病例組與對照組RhoE基因片段的表達情況；采用TA亞克隆技術(shù)結(jié)合PCR法對RhoE基因擴增產(chǎn)物cDNA片段進行測序；采用Blastn軟件對所獲序列進行同源性分析，確?？寺‘a(chǎn)物來源于目的基因的mRNA序列，并用DNAStar軟件對克隆出來的目的基因表

6、達的蛋白的二級結(jié)構(gòu)進行預測、分析。 結(jié)果提取組織總RNA后，用DNaseⅠ(RNasefree)去除痕量DNA污染，經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測，組織總RNA質(zhì)量較好，沒有mRNA的降解。將RT-PCR產(chǎn)物進行1％瓊脂糖凝膠電泳，觀察、成像，經(jīng)圖像分析分析獲得各例條帶的相對積分光密度后，統(tǒng)計學分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，病例組中RhoE的表達較對照組中明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義；對擴增產(chǎn)物進行克隆、測序，測序結(jié)果經(jīng)Blastn