橫紋肌溶解導(dǎo)致急性賢損傷中細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：地震后很多患者出現(xiàn)急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)。擠壓綜合征也稱為創(chuàng)傷性橫紋肌溶解癥，是地震后造成AKI的最主要的原因。腎小管上皮細(xì)胞凋亡是AKI重要發(fā)生機(jī)制之一。目前研究表明，外界刺激通過(guò)死亡受體途徑和線粒體損傷途徑誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡參與橫紋肌溶解腎損傷，但這一過(guò)程中是否有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑參與還尚無(wú)報(bào)道。本研究通過(guò)建立橫紋肌溶解腎損傷大鼠模型，檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)腎組織中關(guān)鍵凋亡因子及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)

2、志物的表達(dá)變化，以明確內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與腎小管上皮細(xì)胞凋亡和橫紋肌溶解腎損傷之間的關(guān)系。Rho激酶是調(diào)控細(xì)胞細(xì)胞凋亡重要作用因子，有研究表明Rho激酶抑制劑可以改善缺血再灌注導(dǎo)致的腎損傷，因此我們選用Rho激酶抑制劑法舒地爾對(duì)模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，以期尋找新的治療靶點(diǎn)。
　　方法：1.建立甘油誘導(dǎo)橫紋肌溶解腎損傷大鼠模型，收集對(duì)照和1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、168h時(shí)間點(diǎn)的大鼠血清及腎臟組織，利用腎

3、功能指標(biāo)和腎組織病理評(píng)估不同時(shí)間點(diǎn)腎臟損傷程度，并選擇在腎臟損傷最重的時(shí)段用TUNEL染色評(píng)估腎小管上皮細(xì)胞凋亡程度，用westernl-blot檢測(cè)腎臟損傷最重時(shí)段的動(dòng)物標(biāo)本中死亡受體途徑和線粒體凋亡途徑關(guān)鍵凋亡因子Caspase-8、細(xì)胞色素C及Caspase-9活性片段的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78和特異性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡因子Caspase-12活性片段的表達(dá)。
　　2.選用藥物法舒地爾提前對(duì)橫紋肌溶解腎損傷大鼠模型

4、進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)觀察血肌酐、尿素氮、PAS染色和TUNEL染色這些檢測(cè)腎臟病理?yè)p傷程度和腎小管上皮細(xì)胞凋亡程度的方法來(lái)評(píng)價(jià)藥物的有效性，并通過(guò)檢測(cè)ROCK1、PTEN和Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12及Caspase-3的表達(dá)量的變化，來(lái)探索該藥物治療橫紋肌溶解腎損傷的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：1.血肌酐隨時(shí)間延伸逐漸升高，48小時(shí)達(dá)峰值(P<0.05)。PAS染色顯示腎小管上皮細(xì)胞1小時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)病變，24小

5、時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)大量壞死、脫落，72小時(shí)腎小管-間質(zhì)損傷組織學(xué)評(píng)分達(dá)峰值(P<0.05)。TUNEL染色可見(jiàn)24h腎小管上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)最高(P<0.05)。橫紋肌溶解腎損傷后三條途徑標(biāo)志性凋亡因子Caspase-8、Caspase-9及Caspase-12活性片段的表達(dá)均明顯上調(diào)，并在12h達(dá)到峰值(P<0.05)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP-78表達(dá)趨勢(shì)同Caspase-12一致。
　　2.法舒地爾治療橫紋肌溶解腎損傷后，腎功能指標(biāo)明顯改

6、善，治療組血肌酐及尿素氮水平明顯低于模型組(P<0.05)。PAS染色顯示治療組腎小管損傷程度較模型組減輕，腎小管-間質(zhì)損傷評(píng)分治療組低于模型組(P<0.05)。TUNEL染色治療組凋亡細(xì)胞數(shù)目明顯少于模型組，凋亡因子低于模型組(P<0.05)。Western-blot結(jié)果顯示治療組ROCK1、PTEN表達(dá)較模型組下調(diào)(P<0.05)。治療組Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12及Caspase-3活性片段的表達(dá)均