α-玉米赤霉醇對體外培養(yǎng)成骨細胞作用的研究.pdf

1、目的：通過觀察植物雌激素α玉米赤霉醇（α-ZAL）對體外培養(yǎng)新生大鼠顱骨成骨細胞的作用，研究植物雌激素α-玉米赤霉醇對大鼠成骨細胞增殖、分化及蛋白表達的影響，探討植物雌激素α-玉米赤霉醇在骨代謝中的作用機理，以期為骨質(zhì)疏松防治藥物的研究開闊思路。
　　 方法：1.采用二次酶消化法分離培養(yǎng)新生（24h）SD 乳鼠顱蓋骨成骨細胞。2.應用鈣鈷法堿性磷酸酶(ALP)染色和茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色來鑒定成骨細胞。3.應用噻唑蘭(MTT)法測定

2、植物雌激素α-玉米赤霉醇對成骨細胞增殖的影響。4.采用對硝基苯二鈉基質(zhì)動力學法檢測了24 h和48h 成骨細胞堿性磷酸酶活性的改變。5.采用免疫組化法觀察α玉米赤霉醇對體外培養(yǎng)成骨細胞的Bax、Bcl-2表達的影響。
　　 結(jié)果：1.細胞形態(tài)學觀察：剛接種的原代成骨細胞呈球形，24h內(nèi)存活細胞已沉降貼壁，培養(yǎng)第2天能夠完全展開，呈三角形、梭形，核明顯增大；傳代培養(yǎng)5天，細胞形態(tài)可見多樣化，胞漿豐富，向外伸展，伸出多個偽足，與周圍

3、細胞的偽足相互連結(jié)，細胞半融合；培養(yǎng)一周左右，可見長索形、多角形、條索形，匯合時細胞呈鋪路石狀，可重疊生長。2.成骨細胞的鑒定：ALP 染色可見90％細胞染色陽性,胞質(zhì)中出現(xiàn)灰黑色顆?；驂K狀沉積，礦化結(jié)節(jié)呈橘紅色結(jié)節(jié)、邊界清晰，可證明為成骨細胞。3.對大鼠成骨細胞增殖的影響：大鼠成骨細胞在含有不同濃度（10-5mol/L～10-10mol/L）α玉米赤霉醇以及含有10-10mol/L的雌二醇和無藥物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后，與E2組比較，

4、α-ZAl10-7mol/L、α-ZAl10-10mol/L 這兩種濃度差異無顯著性（P＞0.05），說明這兩種濃度有促進成骨細胞增殖的作用4.對大鼠成骨細胞外堿性磷酸酶活性的影響：與正常組比較，三組均有顯著性差異，與E2組比較，α-ZAl10-7mol/L、α-ZAl10-10mol/L 這兩種濃度差異無顯著性（P＞0.05），說明這兩種濃度均可以促進成骨細胞分泌ALP。在促進成骨細胞分泌ALP的過程中，隨著用藥天數(shù)的增加，ALP 含