氟對(duì)體外培養(yǎng)山羊成骨細(xì)胞增殖分化及凋亡的調(diào)控.pdf

1、Y 7 7 4 8 6 4分類號(hào)：密級(jí)：。專目差≮犬等碩士學(xué)位論文單位代碼：1 0 0 1 9學(xué) 號(hào)：s 0 2 3 2 1氟對(duì)體外培養(yǎng)山羊成骨細(xì)胞增殖分化及凋亡的調(diào)控R e g u l a t o r y A s p e c t s o f F l u o r i d e o nP r o l i f e r a t i o n ，D i f f e r e n t i a t i o na n d A p o p t o s i s

2、 o f C a p r i n e O s t e o b l a s t s C u l t u r e d ／n v i t r o研 究 生； 鮭譙攫指 導(dǎo) 教 師： 夔 蠖 副熬援合作指導(dǎo)教師： 全么善 熬援薟筮建 副夔援申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別： 壅堂亟±專 業(yè) 名 稱： 監(jiān)鏖整醫(yī)堂研 究 方 向： 動(dòng)物萱差岱鱟曼史重痘所 在 學(xué) 院： 動(dòng)物匡堂院二零零五年六月A b s t r a c tT h e p r e s e

3、n ts t u d y i sd e s i g n e dt o a n a l y z et h er e g u l a t i o n so ff l u o r i d eo nr u m i n a n tb o n em e t a b o l l s m ，a n dt o d i s c o v e r t h e p r o c e s s e s a n dm e c h a n i s mo fh o w f

4、l u o r i d e a f f e c t s c a p r i n e p e r i o s t e u m d e r i v e do s t e o b l o s t s ，w h i c hv c e l ti s o l a t e db y m e a n s o f t i s s u ec u l t u r e ，c o m p l e t ea n di n c o m p l e t ee n z

5、y m e d i g e s t i o n ，r e s p e c t i v e l y ．T h e yt h e n r o u t i n e l y c u l t u r e d i n D M E M s u p p l e m e n t e dw i t h 15 ％h e a t —i n a c t i v a t e d f e t a lb o v i n eS C r L l mu n d e r3 7

6、 ℃，h u m i d i f i e da n d5 ％C 0 2c o n d i t i o n s ．O ns u c ha b a s i s ，o s t e o b l a s t sw e r et h e ns u b c u l t u r e du n t i l t h e yh a dc o m e s e m i —c o n f l u e n t ，a n d i d e n t i f i e db

7、ym o r p h o l o g y ( G i e m s a a n d H ．E ．s t a i n ) ，s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e ( S E M ) ，A L P a n dm i n e r a l i z e d n o d u l e ( a l i z a r i n r e d a n d v a n k o s s a )s t a

8、 i n ．T h ee f f e c t so fd i f f e r e n t d o s e so ff l u o r i d eo nc e l l u l a r m o r p h o l o g yw e r ei n v e s t i g a t e d b y i n v e r t e dp h a s e —c o n t r a s t m i c r o s c o p e a n d S E M ，

9、w h i l e t h e r e g u l a t i o n s o n p r o l i f e r a t i o n ，d i f f e r e n t i a t i o n a n dc a l c i f i c a t i o n o f o s t e o b l a s t s w e r e m e a s u r e d b y t e t r a z o l i u m s a l t t e s

10、t ( M T T m e t h o d ) ，A L P a c t i v i t yd e t e c t i o na n d m i n e r a l i z e d n o d u l ec o u n t ．T od e t e r m i n ew h e t h e rf l u o r i d e w o u l di n d u c e a p o p t u t i c c e l ld e a t h ，w

11、 e m o n i t o r e d D N A f r a g m e n t a t i o n a n d t h e c e l l u l a r m o r p h o l o g y w i t h D N A l a d d e LH o e c h s t 3 3 3 4 2 ／P l d o u b l e s t a i n i n ga n dt r a n s m i s s i o ne l e c t

12、r o nm i c r o s c o p e ( T E M ) ．T h el e v e lo f a p o p t o s i sw a s a n a l y z e d w i t h a f l u o r e s c e n c e —a c t i v a t e d c e l l s o r t e r ( F A C S ) b y t h e A n n e x i n - V - F I T C a n

13、d t h ep r o p i d i u mi o d i n e ( P 1 ) d o u b l e s t a i n i n gm e t h o d C e l l —c y c l ea n a l y s i sw a s a l s oe x a m i n e d w i t hF A C S u s i n gP 【s t a i n i n g ．T h ee x p e r i m e n t a lr e

14、 s u l t sa r e a sf o l l o w s ：1 ．T h er e s u l t si n d i c a t e dt h a ta d h e s i o n t i m ea n dc o m p l e t e - c o n f l u e n c et i m e o f p e r i o s t e u md e r i v e do s t e o b l a s t sw i t hi n

15、c o m p l e t ee n z y m e d i g e s t i o nw a s a t4 h r sa n d 1 0d a y s ，a n dt h em e r g i n g o s t e o b l a s t sa n da p p a r e n t m i n e r a l i z e dn o d u l e s o nd a y 4a n d 1 4f r o mp a s s a g ec

16、u l t u r e s ，r e s p e c t i v e l yT r i a n g u l a r ,p o l y a n g u l a x c e l l sa n d o b v i o u s c e l lp r o c e s s e sw e r e o b s e r v e d ．T h e c e t l sh a v el a r g en u c l e ia n d1 ～3n u c l e

17、o l i ．A L Pa n dm i n e r a l i z e dn o d u l es t a i ns h o w e d p o s i t i v er e a c t i o n ．R o u g hc e l l p r o c e s s e sw e r eo b s e r v e d ，w h i c hj o i na n do v e r l a pc e l l su n d e rS E M ．2

18、 ．A f t e rf r e e z i n g ·t h a w i n g ，t h ev i a b i l i t yo f o s t e o b l a s t sd e t e r m i n e du s i n gt r y p a nb l u es t a i ni sm o r et h a n9 0 ％．C o m p a r e d w i t hp r i m a r yc u l t u r

19、 e ，n ob i o —c h a r a c t e r i s t i cc h a n g e s w e r eo b s e r v e dt i ' o mt h e15 t hf i l i a lc e l l s ．3 ．O n4 8a n d9 6h r so fe x p o s u r e t o f l u o r i d e ．1 ．0 X 1 0 ～1 ．0 ×1 0 5 m o l

20、／Lc o n c e n t r a t i o n p r o m o t e so s t e o b l a s tp r o l i f e r a t i o n ．a(chǎn) n dt h er o l eo f p r o m o t i n g o s t e o b l a s tp r o l i f e r a t i o nw a so b v i o u sw i t h 】．0 ×1 0 1a n d 1

21、 ．0X 1 0 —6m o l ／Lf l u o r i d e ( P < 0 ，0 1 ) c o m p a r e d w i t hc o n t r o l s ．H i g h e rc o n c e n t r a t i o no f f l u o r i d ew i t hI ．0 X1 0 —3 m o l ／L s i g n i f i c a n t l y s u p p r e s s e

22、 d t h e c e l l p r o l i f e r a t i o n f P < O ．0 D ．I ．0 ×1 04 a n d 5 ．0 X1 0 —4m o l ／L f l u o r i d e h a d n o e f f e c t s o n o s t e o b l a s t p r o l i f e r a t i o n a f t e r 4 8 h r s o fe x

23、p o s u r e ，b u t s i g n i f i c a n ts u p p r e s s i o nw a s o b s e r v e da f t e r 9 6 h r s ( P < o 0 1 ) ．4 ．A L Pa c t i v i t y a n dm i n e r a l i z a t i o n a b i l i t y w e r eo b v i o u s l y i n