2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、為了探討氟化物對機體骨骼代謝的影響和骨鈣素(OCN)在氟中毒所致骨相損害中的作用,本研究采取酶完全消化法或酶半消化植塊培養(yǎng)法,以小鼠(初生24h)和胎羊(2~3月齡)頭蓋骨為材料分離成骨細胞,通過形態(tài)觀察(Giemsa染色)、堿性磷酸酶(ALP)和鈣化結(jié)節(jié)(VonKossa)染色來鑒定細胞,并進行傳代培養(yǎng);從體外培養(yǎng)的成骨細胞提取總RNA,經(jīng)RT-PCR擴增出OCN基因序列,經(jīng)克隆、藍白斑篩選、質(zhì)粒的限制性內(nèi)切酶酶切鑒定后,進行測序和生

2、物信息學分析;利用實時熒光定量PCR來檢測不同濃度NaF對體外培養(yǎng)成骨細胞OCN基因表達的影響。結(jié)果表明: 1.在10mMβ-甘油磷酸鈉和50μg/mL維生素C誘導培養(yǎng)下,分離的小鼠、綿羊成骨細胞確實表達OCN基因。綿羊OCN基因編碼區(qū)全長297bp,較人和牛的OCNcDNA少3個核苷酸;BLAST-N分析表明與黃牛OCNmRNA序列的同源性為95%,與人的同源性為88%。綿羊OCN的測序結(jié)果已被GeneBank收錄,登錄號為D

3、Q418490。 2.成骨細胞在體外誘導培養(yǎng)下,第3d即有OCNmRNA的表達,對照組和5×10-4mol/LNaF組分別在第7d和第11d達高峰;高峰過后OCNmRNA的表達急劇減少,之后則呈緩慢下降趨勢,至19d仍有表達。除了第7d,5×10-4mol/LNaF組OCN基因在各時間段的表達均較對照組高。另外,各濃度NaF均能刺激體外培養(yǎng)成骨細胞OCN基因的表達,且呈劑量依賴關(guān)系,當濃度為5×10-4mol/L時OCN基因表達

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