異煙肼和利福平對體外培養(yǎng)成骨細胞影響的實驗研究.pdf

1、目的： 研究異煙肼(Isoniazid，INH)和利福平(Rifampicin，RFP)對大鼠成骨細胞(osteoblast，OB)增殖、堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase，ALP)活性和礦化能力的影響。 方法： 一、體外大鼠OB的分離及原代培養(yǎng) 取新生SD大鼠顱骨，采用多次酶消化法分離OB，進行原代培養(yǎng)；通過相差顯微鏡下形態(tài)學觀察、Gomori氏鈣鈷法ALP染色、茜素紅鈣結節(jié)染色對OB進

2、行鑒定：MTT法測定細胞增殖，繪制生長曲線。 二、利福平和異煙肼對成骨細胞影響的研究 采用2-4繼代OB進行實驗。(1)劑量分組：實驗分為對照組(不加藥物)，INH各濃度組(100、80、50、25、10ug/ml)，RFP各濃度組(100、10、5、2.5、1ug/ml)，INH+RFP組(濃度分別為50ug/ml和2.5ug/ml)。(2)利福平和異煙肼對OB增殖影響：待細胞貼壁后，換加藥培養(yǎng)基，作用72h后測定細胞

3、MTT(OD)(3)利福平和異煙肼對成骨細胞ALP活性的影響：待細胞貼壁后，換加藥培養(yǎng)基，作用72h后測定細胞內(nèi)ALP活性和蛋白含量(4)利福平和異煙肼對OB礦化能力的影響：待細胞貼壁后，換加藥培養(yǎng)基，培養(yǎng)18天，茜素紅染色，鏡下計數(shù)各組礦化結節(jié)。 結果： 一、體外大鼠OB的分離及原代培養(yǎng) 分離所得的細胞具有典型的OB形態(tài)學特征，ALP改良Gomori氏鈣鈷法細胞化學染色大部分細胞胞漿可見棕褐色陽性顆粒，并可在體

4、外形成礦化結節(jié)，茜素紅細胞化學染色法呈現(xiàn)紅色反應，鑒定為OB，且純度較高，功能活躍。生長增殖情況可分為潛伏期、對數(shù)生長期、平臺期及衰退期，符合細胞的生長規(guī)律。 二、利福平和異煙肼對成骨細胞影響的研究 (1)INH對OB的影響：與對照組比較，INH各濃度組對大鼠OB的增殖無明顯抑制作用，在50ug/ml及以下濃度時大鼠OB的ALP活性和礦化能力無明顯下降，80ug/ml及以上濃度時即有顯著下降(P＜0.05)：(2)利福平

5、對OB的影響：RFP在5ug/ml及以上濃度時即抑制大鼠OB的增殖、使ALP活性及礦化能力顯著降低(P＜0.05)，在2.5ug/ml及以下濃度時對大鼠OB的增殖、ALP活性和礦化能力無明顯影響(3)INH+RFP對OB的影響：當INH和RFP(濃度各為50ug/ml和2.5ug/ml)聯(lián)合應用時，在MTT(OD)值、ALP活性及礦化結節(jié)計數(shù)上與對照組相比均無顯著性差異，P＞0.05。 結論： 一、INH各濃度組對大鼠O

6、B的增殖無明顯抑制作用，在50ug/ml及以下濃度時大鼠OB的ALP活性和礦化能力無明顯下降，80ug/ml及以上濃度時即有顯著下降(P＜0.05)； 二、RFP在5ug/ml及以上濃度時即抑制大鼠OB的增殖、使ALP活性及礦化能力顯著下降(P＜0.05)，在2.5ug/ml及以下濃度時對大鼠OB的增殖、ALP活性和礦化能力均無明顯影響； 三、當INH+RFP(濃度各為50ug/ml和2.5ug/ml)聯(lián)合應用時對大鼠O