鈦合金顆粒對體外培養(yǎng)人成骨細胞作用的實驗研究.pdf

1、目的：研究鈦合金顆粒對體外培養(yǎng)條件下的成骨細胞增殖、分化能力的作用以及骨保護素(OPG)基因表達的影響，探討人工關(guān)節(jié)假體松動中磨損顆粒導(dǎo)致的骨溶解機制?！　》椒ǎ?、取人胚胎顱骨骨膜，采有用酶消化法和組織培養(yǎng)法獲取成骨細胞體外培養(yǎng)并傳代，觀察細胞形態(tài)，生物特點及成骨特性，并繪制生長曲線同時堿性磷酸酶染色鑒定成骨細胞以及比較凍存前3-5代與凍存后成骨細胞的特點。2、電鏡下觀察鈦合金顆粒的形態(tài)并測量其粒徑，將不同濃度的鈦合金顆粒(1mg/

2、ml,0.1mg/ml，0.01mg/ml)與成骨細胞共同培養(yǎng)，分別于第2、4、6天用MTT法測量細胞增殖情況及4、7、10天用試劑盒檢測堿性磷酸酶活性。3、分別將不同濃度的鈦合金顆粒(1mg/ml,0.1mg/ml，0.01mg/ml)與成骨細胞基因培養(yǎng)3、6、9天用RT-PCR方法半定量測定骨保護素(OPG)基因mRNA的表達。并用統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析?！　〗Y(jié)果：1、培養(yǎng)的骨膜成骨細胞形態(tài)多為梭形和多角形與成纖維細胞相似，3

3、-5代成骨細胞生長特點穩(wěn)定，具有成骨能力，凍存后成骨細胞生存率，增殖能力明顯受到影響。2、①鈦合金顆粒直徑90％小于3um，與體內(nèi)檢測到磨損顆粒大小基本一致。②10mg/ml組鈦合金顆粒抑制了成骨細胞的增殖(P＜0.05)。③不同濃度的鈦合金顆粒對成骨細胞堿性磷酸酶(ALP)的活性均有影響(P＜0.001)。3、不同濃度的鈦合金顆粒均抑制了成骨細胞骨保護素(OPG)基因表達，隨時間延長，0.01mg/ml組對OPG基因作用逐漸降低。