IGF-I對體外培養(yǎng)的奶牛成骨細(xì)胞骨形成的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度IGF-I對體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞骨形成功能的影響。 方法：無菌取出新生奶牛的肋骨采用組織塊培養(yǎng)法獲取成骨細(xì)胞，進(jìn)行原代、傳代培養(yǎng)，取第二代細(xì)胞通過形態(tài)學(xué)觀察、堿性磷酸酶染色、鈣化結(jié)節(jié)染色等方法鑒定后作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，將用?0％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液配制的不同濃度的IGF-I與第二代奶牛的成骨細(xì)胞共同培養(yǎng)。采用MTT法觀察：IGF-I對成骨細(xì)胞增殖功能的影響（用波長490nm處OD值表示）和氨基安替吡啉測酚法（金氏

2、法）觀察對成骨細(xì)胞分化功能的影響（用堿性磷酸酶活性表示），茜素紅染色法（ARS法）觀察對成骨細(xì)胞礦化功能的影響（用每視野礦化結(jié)節(jié)數(shù)表示）。 結(jié)果：采用組織塊培養(yǎng)法獲得的細(xì)胞具有典型成骨細(xì)胞的形態(tài)特征，細(xì)胞堿性磷酸酶染色呈陽性且陽性率達(dá)93％，鈣化結(jié)節(jié)經(jīng)茜素紅染色呈陽性，符合成骨細(xì)胞的生物學(xué)特性，表明培養(yǎng)的細(xì)胞為高純度的成骨細(xì)胞。加IGF-I培養(yǎng)后測定細(xì)胞增殖結(jié)果顯示：不同濃度的IGF-I均能促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖。在1μg／L-10

3、0μg／L IGF-I濃度范圍內(nèi)的促進(jìn)作用呈現(xiàn)劑量－效應(yīng)關(guān)系，與對照組相比，1μg／L試驗(yàn)組即可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，但與對照組比較差異不顯著（P＞0.05），10μg／L、50μg／L、10μg／L試驗(yàn)組與對照組比較均有極顯著性差異（P＜0.01），以10μg／L試驗(yàn)組最為顯著（p＜0.01），20μg／L實(shí)驗(yàn)組則呈現(xiàn)下降，IGF-I的刺激作用不再增加。IGF-I對奶牛成骨細(xì)胞的促增殖作用還存在時間－效應(yīng)關(guān)系，隨著作用時間的延長，吸光度值

4、升高，作用至第5d時，吸光度值最高，到第7d，吸光度值有所下降。加IGF-I培養(yǎng)5d后測定堿性磷酸酶（ALP）活性結(jié)果顯示：不同濃度的IGF-I均能促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化，與對照組比較，1μg／L試驗(yàn)組差異不顯著（P＞0.05），1μg／L和5μg／L試驗(yàn)組差異均極顯著（P＜0.01）。加藥培養(yǎng)18d后礦化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)結(jié)果顯示：不同濃度的IGF-I均能促進(jìn)成骨細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)的形成，與對照組相比較，1μg／L試驗(yàn)組差異不顯著（P＞0.05），10μ