OPN對體外培養(yǎng)人OA軟骨細(xì)胞MMP13表達(dá)的影響.pdf

1、目的:采用骨橋蛋白干預(yù)體外培養(yǎng)的人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞,觀察細(xì)胞生物學(xué)特性,檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP13的水平,探討骨橋蛋白參與人骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病的可能機(jī)理。
　　 方法:1、采用Ⅱ型膠原酶消化法處理人關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本獲取大量高純度的軟骨細(xì)胞,采用Ⅱ型膠原免疫組化法對其進(jìn)行鑒定,臺盼藍(lán)染色法檢測軟骨細(xì)胞的存活率。2、正常關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞(A組)和OA關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞(B組)分別在空白和三種不同濃度OPN的干預(yù)作用下進(jìn)行培養(yǎng):A1組(正常軟骨細(xì)胞空

2、白對照組),A2組(正常軟骨細(xì)胞2ng/ml OPN干預(yù)組),A3組(正常軟骨細(xì)胞4ng/ml OPN干預(yù)組),A4組(正常軟骨細(xì)胞6ng/ml OPN干預(yù)組),B1組(OA軟骨細(xì)胞空白對照組),B2組(OA軟骨細(xì)胞2ng/ml OPN干預(yù)組),B3組(OA軟骨細(xì)胞4ng/ml OPN干預(yù)組),B4組(OA軟骨細(xì)胞6ng/ml OPN干預(yù)組),MTT比色法檢測細(xì)胞存活及生長隋況;3、軟骨細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)后,應(yīng)用ELISA法檢測培養(yǎng)上清液

3、中MMP13的水平。
　　 結(jié)果:1、原代人正常軟骨細(xì)胞(A組)和OA軟骨細(xì)胞(B組)存活率分別為(95±1.0)％和(95±1.0)％,無顯著性差異(P＞0.05);2、加入OPN后倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞間貼壁情況無明顯差別;細(xì)胞存活率分別為A1組(98±1.0)％;A2組(97±1.0)％;A3組(98±1.0)％;A4組(97.5±1.0)％;B1組(98.7±0.6)％;B2組(97.7±0.6)％;B3組(98±1.

4、0)％;B4組(97.7±1.5)％;各組間無顯著性差異(P＞0.05);3、軟骨細(xì)胞培養(yǎng)上清液MMP13水平比較結(jié)果:OPN干預(yù)正常軟骨細(xì)胞后各組間MMP13水平無顯著性差異(P＞0.05)。OPN干預(yù)O A軟骨細(xì)胞后,B2組與B1組、B4組與B1組間比較MMP13表達(dá)有顯著性差異(P＜0.05),其他各組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:1、本實(shí)驗(yàn)觀察到體外培養(yǎng)OA軟骨細(xì)胞和正常軟骨細(xì)胞存活率無差異。2、本實(shí)驗(yàn)觀