玉米赤霉烯酮對睪丸間質(zhì)細胞的毒性作用.pdf

1、玉米赤霉烯酮(ZEA)是由鐮刀菌等真菌產(chǎn)生的一種霉菌毒素，廣泛存在于動物飼料和人類的食品中，具有生殖與發(fā)育毒性、免疫毒性，對腫瘤發(fā)生也有一定影響，對動物的生產(chǎn)性能和人類的健康具有較大的潛在威脅。我國玉米赤霉烯酮污染嚴重，影響也越來越廣泛。近年來，玉米赤霉烯酮對雄性動物生殖系統(tǒng)的危害越來越受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn)，玉米赤霉烯酮中毒可導(dǎo)致雄性動物乳腺肥大并呈雌性化、包皮水腫，性欲減退、睪丸萎縮和精液數(shù)量減少且質(zhì)量降低。但到目前為止，人們對玉

2、米赤霉烯酮雄性生殖毒性仍缺乏全面的認識，尤其是在分子水平的認識遠遠不夠。為進一步揭示玉米赤霉烯酮對雄性動物的生殖毒性作用，本研究在建立睪丸間質(zhì)細胞(Leydigcell)毒性實驗體外模型的基礎(chǔ)上，從細胞和分子水平對玉米赤霉烯酮的睪丸Leydig細胞毒性作用進行了探討。
　　 本研究通過MTT法確定了ZEA對睪丸Leydig細胞的作用濃度;對原代培養(yǎng)的SD大鼠睪丸Leydig細胞加入10U/mlHCG，ZEA染毒，ELISA法測定

3、了ZEA對Leydig細胞睪酮分泌的影響作用;通過單細胞凝膠電泳法測定了ZEA對睪丸Leydig細胞DNA的損傷作用;通過流式細胞術(shù)測定了ZEA對睪丸Leydig細胞凋亡率的影響以及利用Westernblot技術(shù)測定了ZEA對睪丸Leydig細胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2表達量的影響。結(jié)果表明:①隨著ZEA劑量的增加，細胞相對活率降低，各劑量組之間均有顯著性差異(P＜0.05)，當(dāng)ZEA濃度為10μg/ml時，細胞相對存活率為54.

4、49％，接近半數(shù)致死濃度(LD50)，因此將實驗的染毒濃度確定為1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml;②ZEA對睪酮的分泌有抑制作用，隨著染毒濃度的增加(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml作用12h)和染毒時間的增長(5μg/mlZEA分別作用0h、1h、6h、12h、24h)，睪丸Leydig細胞睪酮分泌量呈明顯的下降趨勢(P＜0.05);③ZEA對睪丸Leydig細胞具有DNA損傷作用，

5、細胞彗星率隨著染毒濃度的增加而增加，細胞拖尾長度和尾部DNA含量也均呈現(xiàn)出上升趨勢，除ZEA1μg/ml組外，其余各劑量組與對照組均有顯著性差異(P＜0.05);④ZEA能夠誘導(dǎo)細胞凋亡，且細胞的凋亡率以及Bax/Bcl-2隨著染毒濃度的增加呈現(xiàn)出先上升后下降的趨勢，即ZEA低濃度時主要體現(xiàn)誘導(dǎo)細胞凋亡，高濃度時主要導(dǎo)致細胞壞死，隨著染毒時間的延長細胞凋亡率和Bax/Bcl-2均呈顯著的上升趨勢(P＜0.05)。表明ZEA暴露可降低睪丸