玉米赤霉烯酮對(duì)胚胎附植的影響及分子機(jī)理初探.pdf

1、玉米赤霉烯酮(ZEA)是一種類雌激素霉菌毒素，主要危害哺乳動(dòng)物的生殖系統(tǒng)，而豬是最敏感的動(dòng)物。胚胎附植過程受到母體與胚胎嚴(yán)格的同步調(diào)控。雌激素是重要的調(diào)控因子，ZEA作為類雌激素進(jìn)入機(jī)體擾亂機(jī)體內(nèi)分泌平衡，同時(shí)作為真菌毒素侵害子宮內(nèi)環(huán)境，從而影響胚胎附植成功率進(jìn)而影響豬產(chǎn)仔率。關(guān)于ZEA對(duì)胚胎附植過程的影響及機(jī)制研究報(bào)道極少。本文主要以早期妊娠母豬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探索ZEA對(duì)胚胎附植的影響及其分子調(diào)控機(jī)制。本研究分四組每組5頭母豬，在妊娠第

2、7-14天分別飼喂含ZEA濃度為0、1、2、10mg/kg日糧。第21天采樣后完成了子宮內(nèi)膜HE切片、電鏡切片;在分離培養(yǎng)子宮內(nèi)膜原代細(xì)胞的基礎(chǔ)上，完成了ZEA處理的細(xì)胞凋亡、增殖、氧化應(yīng)激、線粒體膜電位等流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)通過Western Blot、mRFP-GFP-LC3雙熒光檢測(cè)體系等實(shí)驗(yàn)技術(shù)分別在組織和細(xì)胞上進(jìn)行檢測(cè)自噬標(biāo)志基因LC3和P62及凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表達(dá)。主要結(jié)果如下:

3、　　1.HE染色結(jié)果顯示子宮內(nèi)膜炎癥出血，血管通透性增加及子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞層有增厚趨勢(shì)。
　　2.隨著ZEA濃度的升高，電鏡下自噬體、溶酶體明顯增多，線粒體破損嚴(yán)重，說明ZEA導(dǎo)致子宮內(nèi)膜組織發(fā)生自噬。
　　3.原代細(xì)胞處理發(fā)現(xiàn)ZEA會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡、增殖率下降;凋亡結(jié)果顯示:細(xì)胞凋亡數(shù)隨著ZEA濃度增加而增加;線粒體膜電位流失及氧化應(yīng)激變化不明顯。
　　4.Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn):高濃度組ZEA導(dǎo)致子宮內(nèi)膜組

4、織Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)水平降低;LC-3Ⅱ和Cleaved Caspase-3蛋白表達(dá)水平升高，但P62沒有伴隨LC-3Ⅱ的升高而降低，證實(shí)ZEA導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡，并且激活自噬，但自噬流并不通暢。
　　5.通過mRFP-GFP-LC3雙熒光實(shí)驗(yàn)得到ZEA導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生自噬，但自噬流被抑制，進(jìn)一步證實(shí)了ZEA激活自噬同時(shí)抑制自噬流的結(jié)論。
　　6.最終結(jié)論:ZEA在母豬胚胎附植過程中，通過子宮內(nèi)膜細(xì)胞的自噬損傷途徑和線粒體