長期給予齊墩果酸對小鼠的肝毒性研究.pdf

1、目的：研究長期給予小鼠不同劑量的齊墩果酸，其體內藥物濃度的變化與肝毒性的關系及對Nrf2等信號通路基因的影響。
　　方法：將40只健康SPF級雄性昆明小鼠隨機分為4組：正常對照組，低劑量組（45.7 mg/kg），中劑量組（91 mg/kg），高劑量組（137 mg/kg），每組10只，連續(xù)給藥90天，末次給藥后1小時，收集動物的血液和肝臟，測定血漿ALT、AKP活性及TBIL含量；HE染色、Masson染色、天狼星紅染色觀察齊墩

2、果酸對肝臟形態(tài)學的影響；LC-MS法檢測血漿和肝臟中齊墩果酸的濃度；RT-PCR法檢測齊墩果酸對小鼠肝臟TGFβ/Smad通路、Hedgehog通路、膽汁酸合成通路以及Nrf2通路基因mRNA表達的影響；Western-blot法檢測肝細胞核內Nrf2蛋白表達。
　　結果：1.給予小鼠小劑量齊墩果酸90天，與正常對照組比較，小鼠體重無明顯變化，肝重指數增加，丙氨酸轉氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（AKP）活性升高，但總膽紅素（TBIL

3、）含量不變，在肝臟HE染色中，正常對照組肝小葉結構清晰完好，齊墩果酸低劑量組出現(xiàn)肝肝細胞輕微腫大，中劑量組出現(xiàn)肝細胞點狀壞死，高劑量肝細胞點狀壞死面積增多；Masson染色觀察到正常對照組匯管區(qū)周圍被染成藍色的膠原纖維含量正常，低劑量組匯管區(qū)，被染成藍色的面積擴大，中劑量組匯管區(qū)內成纖維細胞增生，膠原纖維間隔形成，高劑量組匯管區(qū)內成纖維細胞大量增生，成纖維隔，纖維間隔伴小葉結構紊亂；天狼星紅染色觀察到正常對照組匯管區(qū)周圍被染成紅色的纖維

4、細胞含量正常，隨給藥劑量的增加，被染成紅色的纖維細胞面積增大，高劑量時可觀察到肝細胞出現(xiàn)大面積纖維化。
　　2. LC-MS法檢測到齊墩果酸在血漿中的藥物濃度隨給藥劑量的增加而增加，而肝臟中的齊墩果酸濃度基本相同，且與給藥劑量無關。
　　3.長期給予齊墩果酸對小鼠 TGFβ/Smad通路中Smad7 mRNA的表達具有明顯的抑制作用（P＜0.05）；低劑量和中劑量可誘導 Smad3的表達（P＜0.05）；抑制 Hedegho

5、g通路中的Shh、Smo mRNA基因的表達（P＜0.05）；可抑制膽汁酸合成通路中Cyp27a1和 SHP的mRNA表達（P＜0.05），低劑量對 Nrf2通路中 Nrf2、GCLC、NQO1、GST、HO-1、Mrp2以及 Mrp3的mRNA表達具有誘導作用（P＜0.05）。
　　4. Western-blot法檢測肝細胞核內 Nrf2蛋白在高劑量組中表達明顯升高（P＜0.05）。結論：長期給予小鼠小劑量齊墩果酸會導致肝纖維化