齊墩果酸對秀麗隱桿線蟲壽命的影響及分子機制研究.pdf

1、齊墩果酸（Oleanolic acid，OA）是一種天然的五環(huán)三萜類化合物，普遍存在于食物及120余種天然植物的子葉和根莖中。目前報道齊墩果酸的藥理作用包括保肝解毒、降血糖血脂、抗炎抗病毒、抗腫瘤及抗氧化等。而近年來，齊墩果酸在抗氧化方面的活性引起了人們廣泛的關注。但是，目前尚沒有文獻報道過齊墩果酸在體內的抗衰老活性及可能潛在的作用機制。
　　目的：以秀麗隱桿線蟲（Caenorkabditiselegans，C.elegans）為

2、研究對象，評價齊墩果酸的延壽作用效果并探討其延壽的分子機制。
　　方法：1.壽命分析實驗：將同步化的L4期線蟲分為空白對照組（0μM）和OA給藥組（100μM、200μM、300μM、600μM）進行壽命實驗，初步判斷OA的延壽效果并篩選出最佳給藥濃度。2.壓力應激實驗：通過氧應激實驗和36℃熱應激實驗，確定OA延長線蟲壽命的作用與壓力應激反應是否存在關聯(lián)。3.線蟲體內活性氧簇（reactive oxygen species，RO

3、S）檢測：通過探討OA對線蟲體內ROS的清除能力以進一步確定OA的延壽效果。4.咽泵實驗：比較3、6、10天的空白對照組與OA給藥組線蟲在15s內的咽泵次數以及限食相關突變株壽命實驗，綜合判斷OA的延壽效果是否與熱限制機制有關。5.daf-16(mgDf50)突變株壽命實驗：探討OA對缺失daf-16基因的線蟲壽命是否存在影響。6. DAF-16亞細胞定位實驗：給藥后觀察DAF-16::GFP轉基因線蟲中DAF-16的亞細胞定位情況。7

4、. Quantitative real-time PCR實驗：OA給藥后提取線蟲內總RNA，利用熒光定量PCR檢測daf-16及下游相關基因sod-3、ctl-1、hsp-16.2的表達量變化。
　　結果：1.通過壽命分析實驗可知OA在一定的濃度范圍內可延長線蟲壽命，且300μM OA為最佳給藥濃度。2. OA能顯著提高線蟲在氧應激、熱應激環(huán)境下的生存率，證實OA延壽作用與壓力應激反應有關。3. OA能夠降低線蟲內ROS的水平，進

5、一步說明OA具有延壽效果。4. OA不影響線蟲的咽泵頻率及限食突變株的壽命長短，從而確認OA的延壽作用不是通過熱量限制途徑實現(xiàn)的。5.分子機制研究表明，OA促進DAF-16進入細胞核以提高DAF-16的轉錄活性，進一步啟動與衰老相關的下游基因的表達，從而延長線蟲的壽命。
　　結論：綜上所述，我們以線蟲為實驗對象，評價了OA的延壽作用并對其潛在的分子機制進行了初步探索。daf-16是一個從線蟲到哺乳動物都高度保守的壽命調控轉錄因子，