藥物性肝損傷的臨床特點、預(yù)后評估及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在利福平合用異煙肼致大鼠肝損傷中的作用.pdf

1、目的:
　　(1)總結(jié)藥物性肝損傷(DILI)的臨床特點，探討評估DILI預(yù)后的因素。
　　(2)探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)在利福平（RFP）合用異煙肼（INH）致大鼠肝損傷中的作用及可能機制。
　　方法:
　　(1)回顧性分析近5年我院DILI的臨床資料，運用Logistic回歸分析篩選影響預(yù)后的指標。
　　(2)將32只SPF級雄性Sprague-Dawley（SD)大鼠隨機分成4組，每組8只。正常對照組

2、（N組）：予以等量的生理鹽水每日定時空腹灌胃一次；RFP組（R組）：給予RFP50mg2 kg－12 d－1定時空腹灌胃一次；模型組（M組):INH和RFP各50mg2kg－12 d－1定時空腹灌胃一次；PBA組：INH和RFP同M組，再給予4-苯基丁酸（PBA）160mg2kg－12d－1腹腔注射一次；R組和 M組給予等量溶劑腹腔注射。連續(xù)14d后處死大鼠。留取大鼠血液和肝臟組織標本。全自動生化分析儀檢測大鼠血清中堿性磷酸酶(ALP)

3、、總膽紅素（TBIL)、直接膽紅素（DBIL)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST)、總膽汁酸（TBA)水平。HE染色觀察大鼠肝臟病理學改變。免疫印跡法檢測大鼠肝臟葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白（GRP78）、P65、IκB及膽鹽輸出泵（Bsep）蛋白的表達變化。免疫組化法檢測Bsep蛋白在大鼠肝細胞中的表達及定位變化。
　　結(jié)果:
　　DILI患者女性較多(57.5%)，平均年齡52歲，用藥以中藥、抗菌類及解熱鎮(zhèn)痛類為主。肝細胞型D

4、ILl多見(81.1％)，嚴重程度分級中以中度居多（54.7%），91.5%患者預(yù)后良好。不同嚴重程度肝細胞型DILI間Hy's法則符合率不同（P＜0.05），符合此法則的肝細胞型DILI患者肝衰竭的發(fā)生率為22.9%（11/48）。多因素回歸分析顯示：影響DILI預(yù)后的指標有ALT(OR=1.672，P=0.026)、國際標準化比值（INR）(OR=8.852，P=0.015)。
　　(2)與N組相比，R組、M組大鼠血清TBIL

5、、DBIL、TBA及ALP均升高（P＜0.05），ALT及AST升高不明顯（P＞0.05）；R組大鼠肝臟病理學檢查可見肝細胞脂肪變性，M組可見肝細胞脂肪變性程度加重、部分可見炎細胞浸潤和點灶狀壞死；R組、M組大鼠肝臟中GRP78和P65蛋白的表達量明顯上升（P＜0.05），IκB及Bsep蛋白的表達明顯下降（P＜0.05）。R組、M組肝胞膜上Bsep的平均積分光密度(IOD)分別為3.56±1.18和2.35±1.18，較正常組（9.6

6、3±1.59）下降（P＜0.05），M組肝胞膜上Bsep分布不規(guī)則。與M組相比，PBA組大鼠TBIL、DBIL、ALP及TBA均降低（P＜0.05）；肝臟病理學變化亦明顯改善；GRP78、P65明顯下調(diào)，IκB及Bsep明顯上調(diào)（P＜0.05）；肝胞膜上Bsep的平均IOD值為4.66±1.75，較M組上升（P＜0.05），肝胞膜上Bsep分布較M組規(guī)則。
　　結(jié)論:
　　(1)DILI患者大部分預(yù)后較好。發(fā)病時ALT及IN

7、R是預(yù)測DILI預(yù)后的獨立指標。
　　(2)RFP可導(dǎo)致膽汁淤積和肝細胞脂肪變性，上調(diào)GRP78、P65及下調(diào)Bsep、IκB蛋白的表達，減少肝細胞膜上的Bsep并改變其定位。
　　(3)PBA可改善RFP合用INH所致的肝損傷，下調(diào)GRP78、P65及上調(diào)Bsep、IκB蛋白的表達，改善肝細胞膜上Bsep的表達和定位，提示ERS在RFP合用INH誘導(dǎo)的大鼠肝損傷中發(fā)揮重要作用，其可能機制是通過激活NF-κB，抑制Bsep表