MicroRNA與異煙肼所致小鼠抗結核藥物性肝損傷關系的研究.pdf

1、目的：采用INH誘導的小鼠抗結核藥物性肝損傷模型，觀察miR-122、miR-155及氧化損傷指標的動態(tài)變化，初步探討miR-122、miR-155及氧化應激在抗結核藥物性肝損傷發(fā)生發(fā)展中的作用及關系，為抗結核藥物性肝損傷的早期診斷和發(fā)病機制研究提供實驗依據。
　　方法：1）急性毒性實驗：（1）實驗對象：昆明小鼠，對照組（10只）給予生理鹽水，實驗組（70只）予以INH（180mg/kg）灌胃處理，實驗組分別在給藥后的0.25、0

2、.75、1.5、6、12、18、24h和對照組24h留取10只小鼠的血清和肝組織標本。（2）實驗方法：HE染色法，光學顯微鏡下觀察肝組織病理學變化；全自動生化分析儀檢測血清ALT和AST水平；實時熒光定量PCR檢測肝組織中miR-122和miR-155表達。（3）統(tǒng)計分析：采用SPSS17.0數據分析，數據以-x±s表示，計量資料采用單因素方差法，相關性分析采用Pearman相關性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　2）慢

3、性毒性實驗：（1）實驗對象：除實驗組每天予以INH（90 mg/kg）灌胃，其中實驗組分別在連續(xù)給藥后的1D、3D、5D、1W、2W、3W、4W和對照組4W留取小鼠的血清和肝組織標本，其他同急性毒性實驗。（2）實驗方法：組織病理學、ALT和AST檢測同急性毒性實驗，一般生化分析法檢測CuZnSOD和MDA的水平；酶聯免疫吸附吸附法檢測MT和MRPS11蛋白表達水平；miR-122表達水平檢測同急性毒性實驗。（3）統(tǒng)計分析：同急性毒性實驗

4、。
　　結果：1）急性毒性實驗：（1）肝組織病理學：給藥后的0.25h，可見少量肝細胞腫脹，隨給藥時間的變化并逐漸加重。（2）ALT和AST：小鼠血清中ALT和AST在0.75h出現顯著性變化，且兩者均上升到最大值。（3）miR-122和miR-155：給藥后miR-122整體呈下降趨勢，0.25h即開始發(fā)生顯著性下降為（56.50±27.77）％，（P<0.05）；miR-155呈上升趨勢，0.75h開始出現顯著性上升（11.2

5、5±1.43）倍。（4）相關性分析：miR-122/miR-155比值與ALT和AST均呈負相關性（r=-0.356，r=-0.246；P<0.05），且與肝組織病理學評分有很好的負相關性（r=-0.779，P<0.01）。
　　2）慢性毒性實驗：（1）肝組織病理學：連續(xù)給藥后的第3D，顯微鏡下可見少量肝細胞腫脹，胞漿稀疏。隨著用藥時間延長，肝組織損傷程度逐漸加重。（2）ALT和AST：兩者分別在2W和3W出現顯著性變化。（3）C

6、uZnSOD和MDA：與對照組相比5D發(fā)生了顯著性變化。（4）miR-122：給藥后整體呈下降趨勢，第3D表達開始下降（88.72±5.15）％（P<0.05）。（5）MT和MRPS11：與對照組相比兩者均在第3D出現變化，且在2W分別下降到最小值（908.68±152.87）pg/ml和（9.72±1.31）pg/ml（P<0.01）。（6）相關性分析：miR-122與CuZnSOD、MDA和MT存在相關性（r=0.240，r=-0.

7、311，r=0.415；均P<0.05)；MRPS11與CuZnSOD，MDA和MT存在相關性（r=0.313，r=-0.250，r=0.366；均P<0.05）。
　　結論：急/慢性毒性實驗中，miRNA與ADLI存在相關性，miR-122低表達和miR-155高表達均與ADLI發(fā)生發(fā)展有關，miR-122/miR-155比值有望成為ADLI早期診斷標志物，且 miR-122可能通過調節(jié) MRPS11參與 ADLI中的氧化應激反