遺傳性角化性皮膚病基因型-表型關系研究.pdf

1、目的:（1）探究一例不典型掌跖角化癥（PPK）家系的遺傳學基礎并運用電腦模擬和細胞功能試驗結合的方法研究其基因型-表型關系。（2）研究靶向基因測序技術在診斷表型異質性強的角化性皮膚病上的效率。通過上述研究旨在建立遺傳性皮膚病基因型-表型關系研究新模式。
　　方法:首先對該家系進行PP K已知關聯(lián)基因全基因測序并對發(fā)現(xiàn)的突變構建分子模型研究其對蛋白功能影響。用mCS M和DUET預測軟件給出自由能變化值(ΔΔG)并關聯(lián)基因型和表型，

2、同時通過 CCK8實驗、anne x in-V f luo res c ein AP C/7-AAD雙染和細胞流式分析觀察在瞬轉四個突變體和野生型基因入H aCa T細胞后的細胞凋亡差異。構建二代靶向基因測序平臺結合San ger測序診斷異質性較大角化性皮膚病。
　　結果：（1）經PP K相關基因全基因測序，僅在先證者、其母、其外公于TRPV3基因發(fā)現(xiàn)致病突變：c.2016 G>A;（2）突變Gln580Pro引起的ΔΔG為正值則

3、對應最輕的臨床表型。其余八個點突變引起的ΔΔG為負值對應相對較重的表型，而在這八個突變中Met672IIe引起的ΔΔG值雖為負值但絕對值最小則對應的表型相對其他七個點突變引起者較輕；（3） CCK8實驗發(fā)現(xiàn)TRPV3基因4個點突變：G573C，W692G，M672I，Q580P在12,24,48,72h時點轉染HaC aT細胞后引起細胞凋亡效應均強于野生型，且峰值均在48h，其中 G573C，W692G引起的細胞凋亡要更顯著，而M672

4、I，Q580P引起的細胞凋亡效應相對較弱；而G573C，W692G對應的患者表型相對較重，M672I，Q580P對應的表型則相對較輕和不典型；（4）細胞流式分析發(fā)現(xiàn)不同的點突變：G573C，W692G，M672I，Q580P，G573C，W692G引起的細胞凋亡數明顯多于M672I，Q580P者。（5）二代靶向基因測序平臺成功診斷表型異質性大且臨床罕見的Neu-Laxo va綜合征和Mal d e Me led a病各2例，均為亞洲首報

5、。
　　結論：（1）TRPV3基因突變：c.2016 G>A是該漢族不典型Olmsted綜合征的致病突變，同時本研究報道的錐形手、硬皮病樣外觀等體征豐富了Olmsted的表型；
　?。?）電腦模擬預測軟件和離體細胞功能試驗共同證實了Olmsted綜合征潛在的基因型-表型關系，同時也建立了遺傳性皮膚病基因型-表型關系的新的研究模式；
　?。?）通過遺傳學研究進一步證實缺乏典型診斷標志如：腔口周圍角化,假性阿洪,禿發(fā)等不典