果蠅miR-184靶基因的篩選及功能的初步研究.pdf

1、miRNA（microRNA）是一類長度為21～25個核苷酸的內(nèi)源性非編碼蛋白的小RNA，其作用遍及生命體的發(fā)生、生長、發(fā)育、分化和死亡等過程。它可通過部分堿基互補配對的方式與目的mRNA靶位的3’非翻譯區(qū)（3’UTRs）結合，導致靶mRNA降解或轉錄后抑制，從而有效的沉默靶mRNA。miR-184是一種廣泛存在于果蠅、小鼠、人等多種生物中的miRNA，在不同物種中具有高度的保守性。本文中我們利用果蠅這一優(yōu)良的動物模型進行研究，希望能以

2、此揭示或提示miR-184的功能。
　　 首先我們利用RT-PCR方法對pri-miR-184在不同時期和組織的表達情況進行了檢測：同時利用液相雜交、核糖核酸酶保護法對成熟miR-184進行了直接的檢測；另外還制備針對pri-miR-184的地高辛探針，對果蠅胚胎進行了原位雜交檢測。結果顯示：果蠅體內(nèi) miR-184的表達伴隨著果蠅的發(fā)育呈現(xiàn)逐漸升高趨勢，在胚胎發(fā)育的中后期、三齡幼蟲時，miR-184的表達量達到了高峰，在不同組

3、織的檢測表明miR-184在眼disc和腦disc高表達；原位雜交結果顯示miR-184在胚胎神經(jīng)系統(tǒng)高表達。這些結果提示了miR-184表達呈現(xiàn)時間特異性和組織特異性，并且可能參與了神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的調(diào)控或正常的神經(jīng)生理功能。
　　 其次我們構建了含mir-184上下游的pW25重組質(zhì)粒，通過顯微注射得到P因子轉基因果蠅，再利用 BL6935利BL6938兩株工具果蠅進行雜交，發(fā)生同源重組，得到21株紅眼果蠅，經(jīng)鑒定其中5株為mi

4、R-184缺失的轉基因果蠅。
　　 由于本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)中胚層特異性工具果蠅（24B-Gal4）驅動miR-184過表達時出現(xiàn)幼蟲發(fā)育遲緩，蛹前期致死，與蛻皮激素及通路異常產(chǎn)生的表型有一定的相似之處，我們推測miR-184可能和蛻皮激素的途徑有關。由于蛻皮激素喂食實驗不能挽救表型缺陷，因此我們推測該表型與蛻皮激素的多少沒有關系，而與蛻皮激素信號通路有關。在本課題中，我們利用miR-184突變體果蠅和前期本實驗室構建的miR-