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文檔簡介
1、單鏈DNA結(jié)合蛋白家族SSBs對于基因組的穩(wěn)定性具有重要作用,參與了DNA復制、DNA損傷檢測與修復、DNA重組和端粒維持等機制。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的DNA單鏈結(jié)合蛋白有復制蛋白A(RPA)、hSSB1、hSSB2等。其中hSSB1是最近發(fā)現(xiàn)的一種DNA單鏈結(jié)合蛋白,DNA雙鏈斷裂(DSBs)會使hSSB1被ATM磷酸化,同時hSSB1穩(wěn)定性增強。在DNA損傷的誘導下,hSSB1在細胞核中積累,從而影響DNA損傷反應中的終末點(endpoints
2、),激活細胞周期檢查點并參與DNA損傷修復。最近有報道稱hSSB1可以與p53和p21分別結(jié)合,同時可以防止p53和p21通過泛素化途徑降解。此外,hSSB1通過對p53和p21的正向調(diào)節(jié)作用,參與了DNA損傷修復反應中的G2/M期檢查點。由于很多人類腫瘤的發(fā)生與p53和p21功能異常相關,因此對于hSSB1功能的研究具有重要的意義。dSSB1是hSSB1在果蠅中的同源蛋白,但尚無關于前者功能的相關報道。
本文介紹了通過遺
3、傳學技術(shù)和細胞學技術(shù)對dSSB1功能進行的初步研究,證明了dSSB1是候選腫瘤抑制基因。通過“p-element非精確剪切”轉(zhuǎn)座重組,得到了純合致死的dSSB1突變體果蠅(dSSB1基因敲除果蠅),并通過rescue實驗證明是由于基因dSSB1的缺失導致了突變體果蠅的純合致死。借助Frt-flp系統(tǒng),在果蠅體內(nèi)誘導了純合的突變克?。╠SSB1-/dSSB1-),發(fā)現(xiàn)dSSB1純合突變組織較周圍組織具有生長優(yōu)勢,表現(xiàn)為突起和增生,并且有部
4、分組織壞死。對dSSB1突變體果蠅的表型驗證表明,dSSB1符合腫瘤抑制基因的基本特征。此外,通過顯微注射得到了dSSB1過表達和RNAi轉(zhuǎn)基因果蠅,并發(fā)現(xiàn)基因dSSB1與Hpo信號通路組分Yki和ft具有遺傳學關系。同時,在果蠅S2細胞中表達了HA-dSSB1、Flag-dp53(果蠅p53同源物標簽蛋白)和Flag-Dap(果蠅p21同源物標簽蛋白),并純化了GST-dSSB1融合蛋白,為研究dSSB1與dp53和Dap的相互作用關
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