雞快慢羽候選基因的篩選.pdf

1、雞的快慢羽可用于雌雄鑒別，且與生產(chǎn)性狀有一定關(guān)聯(lián)。已知雞的快慢羽基因與性染色體Z上的內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒ev21連鎖。在快羽雞中，唯一的ev21插入位點(diǎn)位于催乳素受體基因(PRLR)和精子鞭毛編碼蛋白2(SPEF2)基因序列之間。而在慢羽雞中，兩個(gè)ev21插入位點(diǎn)中的一個(gè)被ev21占據(jù)。在這兩個(gè)插入位點(diǎn)之間為部分重復(fù)的PRLR(duplicatedPRLR，dPRLR)和SPEF2(duplicated SPEF2，dSPEF2)所形成的融

2、合基因（dPRLR/dSPEF2），而在位點(diǎn)的兩側(cè)仍為PRLR和SPEF2基因序列。由于目前缺乏強(qiáng)有力的證據(jù)，這三個(gè)基因（即PRLR，SPEF2和dPRLR/dSPEF2）均是雞快慢羽性狀控制基因的候選者。為了進(jìn)一步對(duì)這三個(gè)候選基因進(jìn)行甄別。本研究首先對(duì)實(shí)驗(yàn)用慢羽雛雞中融合基因拼接處的核酸序列進(jìn)行了PCR擴(kuò)增及測(cè)序，確定融合基因序列的拼接方式與已報(bào)道的拼接方式是否相同;其次，利用鏈特異性RT-PCR確定慢羽雞融合基因是否轉(zhuǎn)錄，且是否存在

3、雙向轉(zhuǎn)錄而形成具有表達(dá)調(diào)控作用的雙鏈RNA分子;最后，利用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)，測(cè)定三個(gè)候選基因在快慢羽雛雞皮膚中的表達(dá)水平，為進(jìn)一步甄別快慢羽性狀控制基因提供科學(xué)依據(jù)。數(shù)據(jù)顯示:1.利用融合基因特異性引物，以蘇禽綠殼蛋雞和海塞克斯慢羽雞的基因組DNA為模板，本研究獲得了一個(gè)1，429bp大小的PCR擴(kuò)增片段。測(cè)序分析表明，融合基因由PRLR外顯子12下游578 bp處和SPEF2內(nèi)含子4下游1，543bp處反向拼接而成，與已報(bào)道的拼接序列

4、不同，提示拼接序列可能存在品種特異性。2.經(jīng)反轉(zhuǎn)錄定量PCR（RT-qPCR）測(cè)定，dPRLR/dSPEF2融合基因可在且僅在慢羽雞皮膚中轉(zhuǎn)錄。通過(guò)鏈特異性RT-qPCR，本研究進(jìn)一步確定該融合基因是雙向轉(zhuǎn)錄的，可形成一個(gè)雙鏈RNA分子。因此，該融合基因可能通過(guò)形成的雙鏈RNA分子來(lái)調(diào)控鄰近基因的表達(dá)，從而影響雞羽毛生長(zhǎng)的速度。不過(guò)，此推測(cè)還有待深入研究加以驗(yàn)證。3.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)1日齡快慢羽公/母雞中PRLR、SPEF2

5、和dPRLR/dSPEF2基因在皮膚中的表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定，數(shù)據(jù)表明公母綠殼蛋雞和公海塞克斯雞皮膚中的PRLR轉(zhuǎn)錄本豐富度在快慢羽之間沒(méi)有顯著差異，在同一羽型的個(gè)體間差異較大。因此，PRLR的表達(dá)與快慢羽表型形成沒(méi)有直接關(guān)系，提示該基因不是雞快慢羽候選基因的有力競(jìng)爭(zhēng)者。與此相反，數(shù)據(jù)表明母綠殼蛋雞皮膚中SPEF2的轉(zhuǎn)錄本豐富度在快慢羽之間存在極顯著差異(P＜0.01)，且慢羽是快羽的16倍，提示SPEF2是快慢羽候選基因的有力競(jìng)爭(zhēng)者。此外