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1、東南大學(xué)碩士學(xué)位論文果蠅micrNA184功能的初步研究姓名:胡江波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:袁榴娣20080530英文摘要TheprimaryresearchofmicroRNA184functionsinDrosophilamelanogasterGraduateStudent:HuJiangboSupervisor:YuanLiudiKeyLaboratoryofDevelopmentalGenesan
2、dHumanDisease,?!疢inistryofEducationSoutheastUniversityABSTRACTInrecentyears,evidencehasaccumulatedthatsmallnoncodingRNAsarealsousedinaconservedmannertoregulatekeydevelopmentaleventsAtleastfourclassesofregulatorysmallnon—
3、codingRNAshavebeendescribed,includingmicroRNAs(miRNAs),shortinterferingRNAs(siRNA),repeatassociatedsmallinterferingRNAs(rasiRHAs)andpiwi—interactingRNAs(piRNAs)[62631AmongthesesmallRNAs,miRNAsarethemostphylogeneticallyc‘
4、onservedandfunctionposttraascriptionallytegulatemanyphysiologicprocesses,includingembryonicdevelopmentmig184isamiRNAconservedinDmelanogasterandDpseudoobscuramouse,humanItexpressesatallstagesofDmelanogasterTheexpressionle
5、velincreasesprogressivelyasindividualdevelopementmiR一184displaysexpressioninthemesoderm,anteriorendoderm,andposteriorendodermofgermbandextendingembryosbyinsituhybridizationtonascentmiRNAtranscripts[141Inordertostudytheim
6、portantregulationroleofmiR184duringtheDmelanogastergrowth,WeconstructedthetransgeneDrosophilaofmiR184WhereafleroverexpressionofmiR184wasfinishedbyusingofdifferentGal4toolflies,atthesametimewefinishedthenonisotopicdetecti
7、onofoverexpressionofmiRI84usingofNorthernblotwithdigoxigeninlabledRNAprobesLatemesodermexpressionusingthe24BGal4drivershowedinterestingresultsDrosophilacoulddevelopmenttothirdinstarlaval,butstayedatthisstageandcouldnotfu
8、rtherdevelopmenttopupaAtthesametime,thesizeofthirdinstarlavalbecamesmallerobvious;themouthhooksbacamemalformedWepresumeithasarelationwithecdysonesignalpathwayThenwe燈iedecdysonefeedingexperimentsEcdysonefailedtescusetheph
9、enotypeWealsostudymiR184loss—offunctiontobuildmiR184nullmutantWeobtainedaPelementstrainfromBloomingtonWeattemptedtogetmiR184nullmutantusingoflocalmutagenesisimprecisePelementexcisionInordertolookforthepossiblelytargetgen
10、eofmiR184,weattemptedtofilterthepossiblelytargetgenesofmiR184onthecelllevelWecotansfectionrecombineplasmidof3’UTRandpAc—miR184intoDrosophilaS2cellAccordingtotheresultsofrelativeluciferaseactivitythatwasmeasured,weanalysi
11、stherelationbetweenmiR184andthe3UTRoftargetgenesTheresultsshowedthattheluciteraSeexpressionlevelofwhichconnectedthe3’UTRofCG812l、CG6583、CGl0217reducedsignificantlyThisprovidescredibledataforsearchingoutthetruetargetgenes
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