小鼠植入前胚胎中microRNA-145表達(dá)及功能的初步研究.pdf

1、Micro-RNA是一類(lèi)長(zhǎng)22-25nt的單鏈非編碼RNA,是重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子,參與生物體發(fā)育、細(xì)胞分化等生理過(guò)程。在多能性細(xì)胞中microRNA-145可以通過(guò)影響Oct4和Sox2基因的表達(dá)影響細(xì)胞多能性,調(diào)控細(xì)胞分化。microRNA-145在哺乳動(dòng)物早期胚胎發(fā)育分化過(guò)程是否存在相同的作用機(jī)制目前尚不清楚。本研究擬以小鼠作為模型,通過(guò)原核顯微注射microRNA-145過(guò)表達(dá)載體獲得microRNA-145過(guò)表達(dá)小鼠胚胎,利用

2、實(shí)時(shí)定量 PCR檢測(cè)小鼠早期胚胎及 microRNA-145過(guò)表達(dá)胚胎中microRNA-145、Oct4和Sox2的表達(dá)變化,分析這種變化與胚胎發(fā)育分化的一致性關(guān)系,初步揭示microRNA-145在植入前胚胎發(fā)育分化過(guò)程的可能作用。圍繞課題目標(biāo),本研究主要開(kāi)展了三個(gè)方面的工作,結(jié)果如下:
　　1、本研究?jī)?yōu)化了昆白小鼠超數(shù)排卵方案。研究結(jié)果顯示:①對(duì)小鼠腹腔注射不同劑量超排激素(5IU PMSG+5IU HCG、5IU PMSG

3、+10IU HCG、10IU PMSG+5IU HCG和10IU PMSG+10IU HCG),對(duì)小鼠超排效果的影響差異顯著(分別為27.50枚/只、19.57枚/只、20.81枚/只、21.71枚/只,P<0.05),各組間的囊胚率差異亦顯著(分別為77.27％、63.99%、65.68%、67.08%,P<0.05)。②對(duì)處于不同發(fā)情狀態(tài)的昆白小鼠做超排處理,間情期組(29.52枚/只)與發(fā)情期組(29.12枚/只)超排結(jié)果差異不顯

4、著(P>0.05),間情期組囊胚率(65.82%)與發(fā)情期組囊胚率(64.70%)結(jié)果差異不顯著(P>0.05)。
　　2、本研究利用 real-time PCR檢測(cè)了小鼠早期胚胎發(fā)育分化過(guò)程中microRNA-145、Oct4和Sox2的表達(dá)變化。研究結(jié)果顯示:昆白小鼠在2-細(xì)胞胚胎、4-細(xì)胞胚胎、8-細(xì)胞胚胎及囊胚中microRNA-145的表達(dá)存在顯著差異(P<0.05),其表達(dá)量隨小鼠植入前胚胎發(fā)育分化不斷升高;昆白小鼠2

5、-細(xì)胞胚胎和囊胚中Oct4和Sox2的表達(dá)量存在顯著差異(P<0.05),它們的表達(dá)量隨胚胎發(fā)育分化不斷降低。
　　3、通過(guò)原核顯微注射microRNA-145過(guò)表達(dá)載體,觀察胚胎的后續(xù)發(fā)育及多能性轉(zhuǎn)錄因子Oct4和Sox2表達(dá)狀況。結(jié)果顯示:注射組的分裂率和囊胚率(74.72%;46.23%)與對(duì)照組(100%;76.44%)相比均存在顯著差異（P<0.05)。利用 real-time PCR檢測(cè)注射組胚胎和對(duì)照組胚胎的micr

6、oRNA-145、Oct4和Sox2基因表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)注射組胚胎中microRNA-145的表達(dá)水平有顯著提高(P<0.05);注射組中2-細(xì)胞胚胎和囊胚中 Sox2的表達(dá)與對(duì)照組存在顯著差異(P<0.05),而 Oct4的表達(dá)各組差異不顯著(P>0.05)。
　　本研究結(jié)果說(shuō)明5IU PMSG+5IU HCG激素組合適合昆白小鼠超數(shù)排卵及胚胎后續(xù)培養(yǎng),小鼠不同發(fā)情狀態(tài)對(duì)超排結(jié)果影響不顯著;在小鼠植入前胚胎發(fā)育過(guò)程中,microR