誘導型Ds轉座載體的構建及其在擬南芥和玉米中的應用.pdf

1、變異材料的篩選和鑒定是開展分子遺傳學研究的先決條件之一，而目前轉座子法篩選變異材料和克隆功能基因是主流方法之一。轉座子法中，Ac/Ds(Activator/Dissociation)標簽系統(tǒng)是構建插入突變體庫較為理想的方法。Ac-Ds系統(tǒng)是玉米hAT家族中的成員，包括自主轉座元件Ac和非自主轉座元件Ds，AcTPase能在自身轉座酶的作用下進行轉座，Ac不斷自主轉座，使轉座植株難以穩(wěn)定，不利于研究。因此，本論文將具有自主轉座能力的AcT

2、Pase加以改造使其能夠合成轉座酶，但是缺失轉座序列，喪失轉座能力。Ds元件不具有編碼轉座酶的功能，只有在Ac轉座酶存在的情況下才能轉座。誘導型表達轉座酶基因，可以使轉座過程變得可控，既能顯著提高轉座頻率，又能快速穩(wěn)定插入事件。
　　 我們知道擬南芥屬還有30％的基因功能是未知的，運用我們提供的這一方法，通過Ds的切離和再插入實驗可以很好地展開轉座子標簽法克隆功能基因的目的，為更好地研究擬南芥以及其他物種中的功能基因提供了一個可

3、行方便的方法。特別是對玉米等糧食作物來說，將會有很深遠的意義。本實驗首先在擬南芥上測試兩個系統(tǒng)的可行性，然后進一步應用于玉米。這將有助于人們對整個植物界的認識，改善農(nóng)作物的品質(zhì)，提高農(nóng)作物的抗逆性以及降低農(nóng)業(yè)生產(chǎn)對環(huán)境的影響。
　　 本實驗中，主要研究結果：
　　 1)驗證兩載體的誘導功能。將pHL1轉化擬南芥，得到單拷貝純合體株系后，通過熒光定量PCR方法分析其誘導情況，結果顯示，誘導后，AcTPase表達量有十幾倍的

4、增加。將pHL2載體轉化擬南芥，得到單拷貝純合體株系后，通過GUS染色，有GUS藍斑出現(xiàn)，證明誘導作用有效。
　　 2)驗證兩載體的轉座功能。將pHL1轉化擬南芥，得到單拷貝純合體株系后，對植株進行誘導，通過GUS染色，巢式PCR分析Ds空供體位點等方法分析Ds-GFP元件轉座情況，結果顯示，有Ds-GFP轉座事件的發(fā)生。將pHL2載體轉化擬南芥，得到單拷貝純合體株系后，誘導后，通過GUS染色，結果顯示有Ds-GFP轉座事件的發(fā)