γ-Tubulin dsRNA載體的構(gòu)建及其在煙草細(xì)胞中的功能研究.pdf

1、隨著人類(lèi)基因組測(cè)序工作的完成，基因組研究已經(jīng)由以全基因組測(cè)序?yàn)槟繕?biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)轉(zhuǎn)向以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)研究。近幾年發(fā)展起來(lái)的RNAi技術(shù)，能快速有效的關(guān)閉相應(yīng)基因，使生物體產(chǎn)生相應(yīng)的功能缺陷表型，從而確定未知基因的功能。以其特異性、高效性和廣泛性的優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)逐漸成為一項(xiàng)極具潛力的基因功能研究技術(shù)。RNA干擾技術(shù)的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)為我們深入了解基因功能、疾病發(fā)生以及植物—病毒互作關(guān)系提供了一個(gè)簡(jiǎn)捷高效的特異性手段。目前利用RNA干

2、擾技術(shù)進(jìn)行植物體發(fā)育過(guò)程中基因功能的研究，植物體內(nèi)致病基因、程序性死亡有關(guān)基因的研究，動(dòng)物的工程化抗病毒研究等還很少，這也為RNA干擾技術(shù)更廣泛的應(yīng)用提供了廣闊的空間。 γ-微管蛋白(γ-TUBULIN)是動(dòng)物細(xì)胞微管組織中心的重要組成成分，它廣泛存在于真核生物細(xì)胞中。已有的研究證明，它在微管成核的起始、裝配和取向等方面具有重要作用，也與有絲分裂紡錘體的形成及細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)。本研究通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)在煙草(N.tabacumvar

3、.SamsunNN)的基因組中同時(shí)引γ-tubulin部分cDNA的反義和正義片段得到了低水平表達(dá)γ-tubulin的煙草植株，發(fā)現(xiàn)降低該基因的表達(dá)對(duì)于植物的發(fā)育有明顯的影響。與對(duì)照相比，低表達(dá)γ-tubulin的無(wú)菌苗植株表現(xiàn)出植株生長(zhǎng)非常緩慢，葉片顏色黃綠，有的植株甚至繼代多次該表型基本穩(wěn)定；根的發(fā)生非常困難，偶有發(fā)生也與普通的轉(zhuǎn)基因植株有明顯區(qū)別，表現(xiàn)為根毛不發(fā)達(dá)、根較粗，皮層內(nèi)側(cè)細(xì)胞較大，輸導(dǎo)組織不發(fā)達(dá)，對(duì)養(yǎng)分的吸收困難。因此我