新型納米載體的構(gòu)建及其在經(jīng)皮免疫中的應(yīng)用.pdf

1、目的:探討以脂質(zhì)體和納米粒為載體的卵清蛋白經(jīng)皮疫苗的制備方法及其對小鼠的免疫效果,以期作為有效的經(jīng)皮疫苗載體用于抗腫瘤治療。
　　 方法:1、采用逆向蒸發(fā)法和薄膜分散法制備了攜載卵清蛋白(OVA)的柔性脂質(zhì)體,以殼聚糖、三聚磷酸鈉為材料運用離子凝膠化法制備了攜載OVA的殼聚糖納米粒,進(jìn)行納米制劑的形態(tài)、粒徑與電位、體外釋放等一系列表征;2、比較不同制備方法對經(jīng)皮滲透的差異,考察不同類型脂質(zhì)體制劑對藥物經(jīng)皮性能、在皮膚中的滯留及分

2、布的影響,評價制備工藝對脂質(zhì)體與納米粒所攜載的卵清蛋白的影響,探討兩種納米制劑的經(jīng)皮途徑;3、通過不同免疫佐劑的篩選,選擇具有增強免疫效果的佐劑用于納米制劑體內(nèi)經(jīng)皮免疫效果評價。4、以卵清蛋白為模型藥物,通過測定血清中的抗OVA免疫球蛋白G(IgG)含量,對不同卵清蛋白制劑經(jīng)皮免疫的效果進(jìn)行評價,考察角質(zhì)層分別對脂質(zhì)體與納米粒經(jīng)皮效果的影響。5、通過考察朗格漢斯細(xì)胞識別攝取卵清蛋白殼聚糖納米粒與遷移至周圍淋巴結(jié)的能力,探索攜載卵清蛋白的

3、殼聚糖納米粒誘導(dǎo)經(jīng)皮免疫的發(fā)生機制。6、以優(yōu)選的制劑為載體,構(gòu)建黑色素瘤相關(guān)抗原gp100抗腫瘤經(jīng)皮疫苗,考察其免疫預(yù)防治.療小鼠黑色素實體瘤效果。
　　 結(jié)果:脂質(zhì)體和納米粒形態(tài)圓整,分布均勻,粒徑分布在200～300nm范圍內(nèi),柔性脂質(zhì)體與殼聚糖納米粒能有效地攜載卵清蛋白并保持其不被降解,包裹了卵清蛋白的納米制劑能穿透皮膚角質(zhì)層并貯存于皮膚中形成儲庫,保持較高的藥物濃度。通過對納米制劑經(jīng)皮機制的考察,攜載了FITC-OVA的

4、柔性脂質(zhì)體與殼聚糖納米粒進(jìn)入皮膚的機制主要是通過皮膚附屬器途徑,包括毛囊,汗腺,皮脂腺等。攜載了卵清蛋白的兩種柔性脂質(zhì)體與卵清蛋白殼聚糖納米粒在經(jīng)皮免疫后能產(chǎn)生較高的特異性抗OVA的IgG,成功引發(fā)小鼠的免疫應(yīng)答。咪喹莫特作為合適的經(jīng)皮免疫佐劑,能有效提高經(jīng)皮疫苗的免疫效果。角質(zhì)層的存在對卵清蛋白柔性脂質(zhì)體的體內(nèi)經(jīng)皮免疫不產(chǎn)生明顯影響。相比兩種柔性脂質(zhì)體,殼聚糖納米粒的體內(nèi)免疫效果較強,但仍受角質(zhì)層屏障作用所影響,在完整皮膚上,殼聚糖納

5、米粒的經(jīng)皮免疫效果有所減弱。在進(jìn)一步的研究中,考察殼聚糖納米粒在經(jīng)皮免疫的發(fā)生機制,通過免疫磁珠法制備了皮膚朗格漢斯細(xì)胞進(jìn)而比較其攝取抗原的能力,相比FITC-OVA溶液組,FITC-OVA殼聚糖納米粒更易被朗格漢斯細(xì)胞識別攝取,通過體內(nèi)示蹤實驗觀察得到攜載了FITC-OVA的殼聚糖納米粒相比單純FITC-OVA溶液更易于被朗格漢斯細(xì)胞識別處理后遷移到周圍淋巴結(jié),從而行使抗原遞呈功能。攜載gp100蛋白的殼聚糖納米粒經(jīng)皮疫苗顯示出一定的

6、抑制小鼠黑色素實體瘤的效果并能提高荷瘤小鼠生存率。
　　 結(jié)論:通過柔性脂質(zhì)體和殼聚糖納米粒的攜載,卵清蛋白能更好地被保護(hù)而不受降解。在經(jīng)皮過程中,以納米制劑為載體的藥物更有效地通過皮膚附屬器途徑進(jìn)入活性皮膚層,形成藥物的貯庫,逐漸擴散到周圍皮膚。角質(zhì)層的存在,對卵清蛋白柔性脂質(zhì)體的體內(nèi)經(jīng)皮免疫效果不產(chǎn)生明顯影響,克服了常規(guī)經(jīng)皮疫苗時角質(zhì)層存在阻滯經(jīng)皮吸收的負(fù)面影響。攜載卵清蛋白的殼聚糖納米粒在經(jīng)皮免疫后可促進(jìn)小鼠體內(nèi)免疫保護(hù)應(yīng)