納米金粒子的制備及其在免疫分析中的應(yīng)用.pdf

1、隨著納米科技的興起,納米金粒子以其獨(dú)特的光學(xué)、電學(xué)性質(zhì)在許多領(lǐng)域表現(xiàn)出潛在的應(yīng)用價(jià)值,引起了人們濃厚的研究興趣。由于不存在內(nèi)源酶干擾及放射性同位素污染等問題，納米金粒子作為標(biāo)記物或顯色劑應(yīng)用于免疫診斷和免疫分析中，逐漸取代傳統(tǒng)的三大標(biāo)記技術(shù)，也逐漸有取代酶聯(lián)免疫分析等檢測(cè)方法的趨勢(shì)。因此探索用納米金粒子標(biāo)記建立快速簡(jiǎn)便的免疫學(xué)定量檢測(cè)方法，有重要的研究意義。本文主要是建立新穎的納米金粒子標(biāo)記的免疫分析方法。 為了制備尺寸均一、單

2、分散的納米金粒子，本文采用兩種水相合成納米金粒子的方法，選擇不同的配方及條件，制備粒徑不同的金顆粒。然后進(jìn)行納米金粒子對(duì)蛋白質(zhì)的標(biāo)記，主要采用兩種方法，其一是抗體蛋白在一定pH條件下通過靜電和配位作用與納米金粒子相互連接，利用納米金粒子的熒光淬滅性質(zhì)，以及粒子表面的Zeta電位探索納米金粒子與蛋白質(zhì)的連接機(jī)理，尋找最佳的連接條件。其二是將抗體蛋白進(jìn)行水解還原后產(chǎn)生Fab’片段，裸露出巰基，與納米金粒子形成穩(wěn)定的Au－S共價(jià)鍵，從而進(jìn)行標(biāo)

3、記。比較兩種標(biāo)記方法，選擇較好的方法應(yīng)用于免疫學(xué)檢測(cè)。 利用納米金粒子的光學(xué)性能和熒光淬滅性能，建立兩種新穎的免疫分析方法，即免疫納米金凝集分光光度法和熒光淬滅分析法，檢測(cè)兩種常用的腫瘤標(biāo)志物即癌胚抗原和甲胎蛋白，應(yīng)用于疾病的診斷。 免疫納米金凝集分光光度法是采用納米金顆粒分別標(biāo)記癌胚抗原相匹配的兩種抗體，通過免疫反應(yīng)形成金標(biāo)記抗體1－抗原－金標(biāo)記抗體2復(fù)合物，研究反應(yīng)溶液中復(fù)合物光學(xué)性質(zhì)的變化，尋找定量免疫分析的方法，

4、建立納米金標(biāo)記免疫凝集光度法，定量檢測(cè)癌胚抗原，最低檢測(cè)極限為15ng/mL。該方法只需檢測(cè)納米金粒子的光吸收變化就可檢測(cè)癌胚抗原的濃度，不需要分離抗原抗體的復(fù)合物，可直接檢測(cè)，簡(jiǎn)單方便。 免疫納米金熒光淬滅分析法是采用納米磁粒子和納米金粒子分別標(biāo)記甲胎蛋白相匹配的兩種抗體，通過免疫反應(yīng)在磁顆粒表面形成抗原抗體復(fù)合物。在磁場(chǎng)的作用下，分離復(fù)合物與游離的納米金標(biāo)記物，在游離物中加入熒光物質(zhì)——異硫氰酸熒光素，熒光信號(hào)淬滅，研究在5