CbCOR15a基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其在水稻和甘蔗中的轉(zhuǎn)化.pdf

1、I、t，0，●’j氣、t‘支～，‘、UDCk鼻，，^＼i1?！踛、，●，0j1。：≯’j。、，‘，、一碩士學(xué)位論文CbCORl5a基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其在水稻和甘蔗中的轉(zhuǎn)化盧雙楠指導(dǎo)教師奎窒拍嬰究員論文答辯日期2Q!!生旦蘭!旦學(xué)位授予日期，。1‘∥、、≮r、^：軋k，≮?！?、釓。f吖^二。k_、一一_。。：’飛o“、’‘文，o“一k，廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文CbCORl5a基水稻(Oryza廣西經(jīng)濟(jì)發(fā)展重要的支柱產(chǎn)業(yè)之一。每年因低溫寒

2、冷導(dǎo)致二者嚴(yán)重減產(chǎn)，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究以CbCORl5a基因?yàn)槟康幕颍琫GFP為報(bào)告基因，構(gòu)建由玉米泛素啟動(dòng)子Ubi調(diào)控的適合水稻和甘蔗遺傳轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)載體，利用基因槍法轟擊洋蔥表皮細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，Ubi能夠成功調(diào)控下游的目的基因eGFP表達(dá)。本研究初步建立了適合秈稻品種桂649R、187R、天B、明恢63、916S、粳型親秈系常規(guī)稻華粳秈74和甘蔗品種ROC22的轉(zhuǎn)化體系，為后續(xù)轉(zhuǎn)基因植株獲得及鑒定奠定基礎(chǔ)

3、，初步探討了轉(zhuǎn)基因過(guò)程中存在的一些問(wèn)題。主要研究成果如下：1、構(gòu)建了適合外源基因?qū)攵i稻和甘蔗的雙元植物表達(dá)載體3300UbiCbCORl5aeGFP，利用基因槍法將目的基因CbCORl5a導(dǎo)入洋蔥表皮細(xì)胞，通過(guò)顯微鏡技術(shù)檢測(cè)到報(bào)告基因eGFP表達(dá)后具有強(qiáng)烈的熒光信號(hào)，結(jié)果表明Ubi啟動(dòng)子能夠有效調(diào)控下游基因CbCORl5a和eGFP成功表達(dá)。2、對(duì)比水稻兩種成熟胚和幼穗愈傷組織誘導(dǎo)率。由強(qiáng)到弱依次為：幼穗、新鮮成熟胚、陳年成熟胚，且誘

4、導(dǎo)出幼穗愈傷組織明顯優(yōu)于成熟胚愈傷組織。6個(gè)水稻品種誘導(dǎo)率由高到低依次為：華粳秈74187R明恢63916S桂649R天B。3、對(duì)比3種分化培養(yǎng)基對(duì)水稻成熟胚愈傷組織的分化效果，結(jié)果表明添加了3種激素(6BA，NAA，IAA)的分化效果最好，利用該培養(yǎng)基分化幼穗愈傷組織，分化率最高可達(dá)8298％。4、利用濃度為2mrJL的2，4DMS培養(yǎng)基誘導(dǎo)甘蔗ROC22愈傷組織，誘導(dǎo)率最高可達(dá)100％，分化培養(yǎng)基能夠使甘蔗ROC22愈傷組織分化率最