2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文sBHMT基因植物表達載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化擬南芥研究姓名:張晏萌申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:余愛麗20080605ConstructionofPlantExpressionVectcarryingSsBHMTgeneTransfmationtoArabidopsisthalianaMastercidate:zhangyanmengMaj:BiochemistryMolecularBiolo

2、gySupervis:YuAiliAbstractWiththedevelopmentofgeicengineeringwecantransfersomeproteincodinggeneswhichhaveimptantphysiologicalfunctionsbutdonotexistinplantintoplantsfadjustingdevelepmentofplantimprovingqualityofplantetc.Be

3、tainehomocysteinemethyltransferase(BHMT)whichisamethylmetabolizingenzymeinanimalsmicroganismscancatalyzemethylofbetaineshiftingtohomocysteinefmingdimethylglycinemethionine.Thereisnoreptofitsexpressionaboutplantuntilnow.A

4、ccdingtotheacterofSsBHMTthatcanpromotesynthesisofproteinbyregulatingmethioninemetabolism.Metwassubstrateofadenosinemethionine(SAM)whichisdominatemethyldoninplant.Methylhavebeentakenpartinmetabolizingadjustingofplant.BHMT

5、wastransferredintoplanttoseekfactiontoplant.RNAwasextractedfromfreshpigliver.SsBHMTgenewasamplifiedbyRTPCR.AfterconfirmingthatitssequencewascrectbysequencingprokaryoticexpressionvectpET30aSsBHMTwasconstructedtransferredi

6、ntoE.coliER2566BL21(DE3).Theobjectiveproteinwasinducedpurified.BySDSPAGEelectrophesisanalysisitwasfoundthatthegenewasnotinducedinE.coliBL21(DE3)butmainlyexpressedinthefmofinsolubleinclusionbodyinER2566expressedalittleins

7、upernatant.ThentheconditionsofinducementincludingODvalueofbacilliinductiontemperatureIPTGconcentrationwereoptimized.Theexpressionofobjectiveproteinenhancedthanbefebutstillexpressedmainlyinthefmofinsolubleinclusionbody.Th

8、usinclusionbodydissolvedwithdenaturingagentwaspurtified.BySDSPAGEelectrophesisanalysistherewasaproteinbbetween45KDa66KDawhichsizeisthesameastheexpected.Meanwhiletheeukaryoticexpressionvectp3301SsBHMTcontainingCaMV35Sprom

9、oterwasconstructed.ThisvectwastransferredintoArabidopsisthalianabyflowerdipmethodofAgrobacteriummediated.25strainswerescreenedbysprayingrepeatedly0.5%(vv)herbicide.LeavesDNAof14strainswhichwereedfrom25transgenicstrainswa

10、sextracted.SsBHMTBARgeneof14strainsweretestedbyPCR.TheresultindicatedthatSsBHMThadbeentransferredintoArabidopsisthaliana.SsBHMTgenewasexpressedpurifiedtransferreditsplantexpressionvectintoArabidopsisthalianawhichprovides

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