廣譜抗病hrp基因誘導(dǎo)型植物表達(dá)載體構(gòu)建.pdf

1、本研究利用來源于歐文氏梨火疫病菌(Erwinia amylovora)能賦予植物對多種病原菌產(chǎn)生抗性的hrpN基因,并將其置于具有損傷和病原侵染誘導(dǎo)特性的Wun1啟動子和來源于金花菊(Flaveria bidentis)對啟動子具有顯著增強(qiáng)作用的Me1基因3'非翻譯區(qū)組成的高效調(diào)控元件下,旨在通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育廣譜抗病馬鈴薯品種,以解決當(dāng)前馬鈴薯抗病品種匱乏及現(xiàn)有抗病品種抗病譜窄的問題.目前,本研究完成的階段性工作有:1)Wun1啟動子

2、克隆.2)Me1 3'非翻譯區(qū)克隆.3)hrp基因亞克隆.4)GFP基因亞克隆.5)Wun1啟動子活性和Me1 3'非翻譯區(qū)增強(qiáng)作用鑒定,發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)化pBIWG和pBIWGM質(zhì)粒DNA的材料中GFP的表達(dá)量明顯高于轉(zhuǎn)化pBIG和pBIGM質(zhì)粒DNA的材料,證明Wun1啟動子具有較強(qiáng)的活性,同時(shí)Me1 3'非翻譯區(qū)也具有明顯的轉(zhuǎn)錄表達(dá)增強(qiáng)作用.6)hrp基因在微生物中表達(dá):將hrp基因連接到原核表達(dá)載體pET28a(+)的T7啟動子和終止子

3、之間,構(gòu)建成N端攜帶6×His標(biāo)簽子的原核表達(dá)載體,通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá),提取表達(dá)產(chǎn)物,經(jīng)SDS-PAGE電泳分析,得到了與推算的hrp基因表達(dá)產(chǎn)物分子質(zhì)量(約42×10<'3>Da)相符的特異蛋白條帶.7)hrp基因植物表達(dá)載體構(gòu)建:將目的基因與植物表達(dá)載體pBI121進(jìn)行連接,構(gòu)建了hrp基因植物表達(dá)載體pBIHM(CaMV 35S-hrp-Me1 3')和pBIWHM(Wun1-hrp-Me1 3').8)農(nóng)桿菌工程菌的獲得:運(yùn)用