植物廣譜抗病基因克隆及載體構(gòu)建的研究.pdf

1、園林植物多進(jìn)行保護(hù)地栽培，高溫高濕的局部小氣候使園林植物更容易感染多種病害，而一旦染病則會(huì)嚴(yán)重影響園林植物的觀賞價(jià)值，造成經(jīng)濟(jì)上的重大損失。一方面，園林植物抗病育種周期長(zhǎng)，能夠用做抗病育種的園林植物種質(zhì)資源貧乏，短時(shí)間內(nèi)園林植物抗病育種難以有所大的突破；另一方面，日益蓬勃發(fā)展的園林業(yè)迫切需要能夠抵抗多種病害的廣譜抗病商品植株。 系統(tǒng)獲得性抗性(Systematicacquiredresistance，SAR)是植物抵御病原菌侵染

2、的最有效手段，可以利用SAR信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵功能基因來(lái)啟動(dòng)園林植物自然防御系統(tǒng)，達(dá)到廣譜抗病的目的。NPR1基因在植物的SAR發(fā)生中起著重要的作用，通過(guò)NPR1基因的過(guò)量表達(dá)可以誘導(dǎo)植物SAR的起始，使植物產(chǎn)生對(duì)多種病原菌的廣譜抗病性。TGA2轉(zhuǎn)錄因子能直接和多個(gè)病程相關(guān)基因啟動(dòng)子結(jié)合感應(yīng)SA的調(diào)節(jié)元件結(jié)合，能夠增強(qiáng)病程相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，特異的誘導(dǎo)植物產(chǎn)生SAR，從而啟動(dòng)植物的廣譜抗病。 本研究主要研究成果如下：

3、1.通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR，從擬南芥中克隆出廣譜抗病基因NPR1。測(cè)序結(jié)果顯示所克隆NPR1基因全長(zhǎng)1782bp，與NCBI所登陸的基因100％同源。 2.通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR，從擬南芥中克隆出能夠誘導(dǎo)廣譜抗病的TGA2轉(zhuǎn)錄因子。測(cè)序結(jié)果顯示所克隆TGA2基因全長(zhǎng)993bp，與NCBI所登陸的基因99.8％同源，發(fā)生了兩個(gè)堿基的置換，但所翻譯氨基酸沒(méi)有變化。 3.將NPR1基因正向插入中間載體的CaMV35S啟動(dòng)子和T-nos終止