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文檔簡介
1、 本研究以柿果實為材料，克隆分離了富有柿ACC合成酶基因，成功構(gòu)建了該基因的反義和RNA干擾表達載體，結(jié)果如下： 利用Rneasy(R)PlantMiniKit試劑盒成功提取了高質(zhì)量的RNA，RNA的OD260/OD280比值為2.0979，為mRNA的反轉(zhuǎn)錄及3'RACE的擴增奠定了基礎(chǔ)；根據(jù)已發(fā)表的平核無柿ACC合成酶的保守氨基酸序列，設計了多對簡并引物，經(jīng)反復PCR擴增試驗，篩選出了具有很好重復性的引物組合，上游引物為：
2、5’-TTYCARGAYTAYCAYGGCYTSCC-3’，下游引物為：5’-AAAKACVCKRAACCARCCCGGYTC-3’；建立了富有柿果ACC合成酶穩(wěn)定的RT-PCR體系，在50μLPCR體系中：引物(10μM)各2μL，10×PCRBuffer5μL，dNTPMixture(2.5mMeachdNTP)4μL，cDNA4μL，ddH2O32.75μL，ExTaqDNAPolymerase(5U/μL)0.25μL。PCR產(chǎn)
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