雙價復等位抗性基因導入培育廣譜抗病水稻品系的研究.pdf

1、水稻是中國乃至世界上最重要的糧食作物之一，稻瘟病是世界范圍內影響水稻生產最嚴重的真菌性病害。長期的實踐表明，利用水稻自身的抗病免疫系統(tǒng)，培育抗病水稻品種是防治稻瘟病最經濟有效的方法。研究抗病基因的功能機制，以及不同抗病基因間的互補效應，對培育廣譜抗病品種有重要意義。本研究通過體外遺傳重組，在3個前人克隆的復等位抗病基因Pi9、Pi2和Piz-t的3’端分別融合了蛋白標簽cMyc、AcV5以及HA序列，并通過農桿菌介導法分別轉化并培育了攜

2、帶Pi9、Pi2-AcV5和Piz-t-CHA基因的水稻植株。進一步對轉基因植株進行分析，主要結果如下：
　　1、分別構建了載體pC1301-NBS2-Pi9-cMyc，pC1305-NBS4-Pi2-AcV5和pC2300-NBS2-Pi9-cMyc；分別得到56個，54個和70個轉化克隆。
　　2、通過對轉基因后代的PCR檢測、GUS組織化學染色、Westernblotting檢測以及結合稻瘟菌接種實驗，獲得了攜帶Pi2

3、-AcV5基因且有抗病功能的轉基因植株，同時驗證了前期創(chuàng)制的Piz-t-CHA純合株系。
　　3、采用常規(guī)雜交育種技術將含有Piz-t-CHA和Pi2-AcV5的T1代植株進行有性雜交，結合PCR擴增和Western blotting檢測，獲得了同時攜帶Pi2-AcV5基因和Piz-t-CHA基因的雜種F1代植株，實現(xiàn)兩個等位抗性基因的聚合。
　　本研究創(chuàng)制的材料攜帶蛋白標簽，這為從蛋白水平上研究抗病基因功能機制奠定了重要基